1.一株類芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY,其保藏編號為
CGMCC?No.7724。
2.如權利要求1所述的類芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY,
其特征在于,含有一種固氮基因簇,其為nifBHDKENXV?moeB。
3.一種固氮基因簇,其為nifBHDKENXV?moeB,其核苷酸序列
為:
SEQ?ID?NO.10所示,包含nifB,nifH,nifD,nifK,nifE,nifN,
nifX,moeB,nifV9個基因,其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1-9所
示。
4.含有權利要求3所述固氮基因簇的表達載體。
5.如權利要求4所述的表達載體,其特征在于,其為
pHY300PLK-2。
6.含有權利要求4-5任一所述表達載體的宿主細胞。
7.根據權利要求6所述的宿主細胞,其特征在于:所述宿主細
胞為宿主菌。
8.如權利要求7所述的宿主細胞,其特征在于:所述宿主菌為
大腸桿菌基因工程菌株78-7,其通過如下方法構建得到:
(1)以S1和S2為引物,固氮芽孢桿菌Paenibacillus?sp.18WLY
基因組為模板,PCR擴增帶有自身啟動子的固氮基因簇
nifBHDKENXV?moeB目的片段;所述S1的序列為:
GCTCTAGAGCGGAGACTATTTCCCAAAAT;S2序列為
TGCGGATCCGCGTGTAATGGTTATATGAAT;
(2)將表達載體pHY300PLK和步驟(1)的目的片段分別用
XbaI和BamHI分別雙酶切,回收酶切產物;
(3)在10μl反應體系中分別加入酶切后的表達載體pHY300PLK
1μl和7.5μl目的片段,摩爾比約為1:6,10×ligase?buffer1μl,T4DNA?
ligase0.5μl,混勻;16℃水浴連接16h,轉化感受態細胞;
(4)篩選陽性克隆子,得到含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB
的質粒pHY300PLK-2;
(5)將含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB的質粒
pHY300PLK-2電轉到E.coli?JM109中,得到工程菌株78-7。
9.大腸桿菌基因工程菌株78-7在制備生物固氮微生物菌劑或生
物有機肥中的應用。
10.含有權利要求1所述的類芽孢桿菌18WLY的菌劑。
11.權利要求1所述的類芽孢桿菌18WLY或權利要求3所述的
固氮基因簇在生物固氮中的用途。
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