本發(fā)明公開了一種用于高效構(gòu)建無抗性標(biāo)記重組分枝桿菌的抗性表達(dá)盒。該抗性表達(dá)盒含有精簡(jiǎn)后的潮霉素抗性基因（SEQ ID NO:1所示），以及位于潮霉素抗性基因兩端的dif1和dif2序列。本發(fā)明精簡(jiǎn)后的Hyg基因序列由原來的1.7kb縮短至1kb左右，去掉了轉(zhuǎn)錄終止子，較長的天然啟動(dòng)子等復(fù)雜結(jié)構(gòu)，便于PCR擴(kuò)增，內(nèi)部酶切位點(diǎn)更少（常見酶切位點(diǎn)已被定點(diǎn)突變掉），同時(shí)，Hyg自帶短的人工啟動(dòng)子，在大腸桿菌和分枝桿菌中均可表達(dá)，定向插入時(shí)不影響下游基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。本發(fā)明的抗性表達(dá)盒在精簡(jiǎn)后的Hyg基因兩端添加了dif序列，可以在分枝桿菌中自動(dòng)解離。Hyg基因丟失后，被破壞的基因仍可繼續(xù)表達(dá)縮短的小肽，不影響下游基因的翻譯，從而可有效避免極性效應(yīng)。

1.一種精簡(jiǎn)改造后的潮霉素抗性基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。2.一種用于高效構(gòu)建無抗性標(biāo)記重組分枝桿菌的抗性表達(dá)盒，含有精簡(jiǎn)后的潮霉素抗性基因，以及位于潮霉素抗性基因兩端的dif1和dif2序列，其特征在于，所述精簡(jiǎn)后的潮霉素抗性基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，dif1和dif2序列分別如SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗性表達(dá)盒，其特征在于，所述表達(dá)盒兩段還添加了多重酶切位點(diǎn)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗性表達(dá)盒，其特征在于，所述抗性表達(dá)盒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5或SEQ?ID?NO:6所示。5.含有權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)所述抗性表達(dá)盒的重組質(zhì)粒。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述質(zhì)粒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。7.一種用于高效構(gòu)建無抗性標(biāo)記重組分枝桿菌的重組質(zhì)粒，其含有：?jiǎn)?dòng)子、噬菌體整合位點(diǎn)、整合酶基因、權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)所述的抗性表達(dá)盒、復(fù)制起始位點(diǎn)。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，按順時(shí)針方向，依次含有噬菌體整合位點(diǎn)、整合酶基因、權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)所述的抗性表達(dá)盒。9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述啟動(dòng)子為LacZ啟動(dòng)子或BLA啟動(dòng)子，所述復(fù)制起始位點(diǎn)為大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)。10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。