本發明公開了一種具有廣泛宿主的穿梭表達載體。本發明提供了一種質粒，包括如下元件：復制原點oriV、復制蛋白Rep的編碼基因、接合起點oriT、接合蛋白Mob的編碼基因、抗生素篩選標記基因和外源基因表達盒；所述外源基因表達盒自上游至下游依次包括啟動子、供外源基因插入的多克隆酶切位點以及轉錄終止序列。本發明提供的質粒具有廣泛宿主能力，可在宿主中穩定復制，且具有高的接合轉移頻率。本發明對于喜溫嗜酸硫桿菌的遺傳轉化具有重大價值。