本發(fā)明公開(kāi)了一種角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基組分為：5mL 100×雙抗、10～20ng/ml人重組EGF、5～10ug/ml胰島素、1～5x10M 3?碘甲狀腺原氨酸、0.2～1ug/ml氫化可的松、10～20ng/ml霍亂毒素、10～15%胎牛血清、余量為DMEM和/或DMEM/F12；采用I型膠原蛋白作為角膜緣干細(xì)胞生長(zhǎng)的基底物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)板等材料做涂層處理，提高角膜緣干細(xì)胞的純度及穩(wěn)定性，采用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基分離角膜緣干細(xì)胞，細(xì)胞中p63、Pax6抗體陽(yáng)性率為96%～100%。建立了一種無(wú)滋養(yǎng)層、無(wú)載體的角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)方法，為角膜緣干細(xì)胞特異性機(jī)制研究和移植治療提供了穩(wěn)定的細(xì)胞來(lái)源。

1.一種角膜緣干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，是將角膜緣組織清洗后，對(duì)角膜緣
組織進(jìn)行酶解得角膜緣干細(xì)胞，加入角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)即可；所述酶解是二次
酶解；所述二次酶解是先用IV膠原酶酶解，再用堿性蛋白酶酶解；
其中，所述角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)基中含有以下組分：5mL 100×雙抗、10-20ng/ml人重組
EGF、5-10ug/ml胰島素、1-5×10^-9M 3-碘甲狀腺原氮酸、0.2-lug/ml氫化可的松、10-20ng/
ml霍亂毒素、10-15％胎牛血清、余量為DMEM和/或DMEM/F12。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角膜緣干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，所述IV膠原酶的
濃度為0.2-0.3％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的角膜緣干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，所述IV膠原酶的
酶解時(shí)間為2-3h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的角膜緣干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，在加
入角膜緣干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)之前，先加入I型膠原蛋白。