本發明公開了一種稀磷酸結合汽爆預處理改進木質纖維酶解糖化的方法，利用黑曲霉C112進行液體發酵生產β?葡萄糖苷酶，在一定培養條件下，所得β?葡萄糖苷酶酶活力可達15.496IU/ml。將黑曲霉C112生產的β?葡萄糖苷酶與里氏木霉RUT C30生產的纖維素酶進行酶系復合，制備出高活性復合纖維素酶，用于處理經稀磷酸浸漬蒸汽爆破處理后的木質纖維酶解糖化率可達到80％以上，同步糖化共發酵乙醇得率達到83.191％。

1.一種稀磷酸結合汽爆預處理改進木質纖維酶解糖化的方法，其特征在于，風干楊木
屑，木屑直徑為1-2mm,長度為2-15mm，1％磷酸按固液比1:2.5預浸漬1h，在蒸汽爆破壓強為
2MPa，保壓時間180s，爆發速度：0.00875S條件下進行爆破；測得含水率為80％，按絕干重的
爆破物占發酵罐裝載量體積的10％裝入2.5L發酵罐中，裝量為1.5L，除開加入的爆破物，檸
檬酸緩沖液和氨水，KH₂PO₄，CaCl₂·H₂O，MgSO₄·7H₂O，酶外，余量為水，加入發酵罐裝載量體
積30％的0.05mol/L的檸檬酸緩沖液，再用1mol/L氨水中和脫毒調節pH值至5.5±0.5，加入
KH₂PO₄ 0.5g/L，CaCl₂·H₂O 0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4g/L，以濾紙酶活FPU為20IU/g加入制
備的混合酶液，50℃下酶解12h后，降溫至37℃，加入發酵菌種釀酒酵母和大腸桿菌KO11混
合酶解發酵96h，細胞干重初始濃度分別為1g/L和0.33g/L；采用氣相色譜法測得乙醇濃度
為30.585mg/ml，乙醇得率達到83.191％；
所述的混合酶液的制備方法如下：分別將保藏編號為CCTCC NO：M2012129的黑曲霉
C112生產的β-葡萄糖苷酶與保藏編號為ATCC 56765的里氏木霉RUT C30生產的纖維素酶濃
縮提純，濃縮后的酶液混合使得β-葡萄糖苷酶活/濾紙酶活比值為1.536；黑曲霉C112通過
產β-葡萄糖苷酶的培養基得到高活力的β-葡萄糖苷酶，培養基配方為：玉米芯25g/L，稻草
粉30g/L，蛋白胨5g/L，(NH₄)₂SO₄ 10g/L，KH₂PO₄ 6g/L，CaCl₂·2H₂O 0.9g/L，MgSO₄·7H₂O
0.9g/L，吐溫-80 1ml/L，Mandels微量元素濃縮液1ml/L，1mol/L檸檬酸緩沖液100ml/L，加
水配制成1L；
黑曲霉C112的產β-葡萄糖苷酶的培養過程如下：將黑曲霉菌C112的種子培養液，以體
積百分比5-8％的接種量接種于裝有40-60ml產酶培養基的250ml搖瓶中，26-28℃，180-
220r/min條件下培養4-6天，離心，取上清液得到粗酶液。
2.根據權利要求1所述的稀磷酸結合汽爆預處理改進木質纖維酶解糖化的方法，其特
征在于，
黑曲霉C112的種子培養：從保存的黑曲霉C112土豆固體平板培養基中挑取孢子，接種
于裝有40-60ml種子培養基的250ml搖瓶中，26-28℃，180-220r/min條件下培養2～3天作為
接種物；黑曲霉C112種子培養基：馬鈴薯250～300g/L，葡萄糖15～25g/L，pH值6.5～7.0。
3.根據權利要求1所述的稀磷酸結合汽爆預處理改進木質纖維酶解糖化的方法，其特
征在于，
黑曲霉C112生產的纖維素酶β-葡萄糖苷酶活為13.368～15.496U/mL，濾紙酶活為
0.183～0.215IU/mL，經超濾濃縮儀濃縮后，β-葡萄糖苷酶活為18.793～24.741U/mL，濾紙
酶活為0.785～0.932IU/mL；里氏木霉RUT C30生產的纖維素酶β-葡萄糖苷酶活為1.205～
1.652U/mL，濾紙酶活為5.931～6.212IU/mL；經超濾濃縮儀濃縮后，β-葡萄糖苷酶活為
9.379～12.662U/mL，濾紙酶活為43.335～48.912IU/mL。