本發(fā)明公開了一種固定化酶催化合成NADPH的方法，包括以下步驟：(1)在二價金屬離子存在下，以NAD和偏磷酸鹽為底物配制成第一反應液，向第一反應液中加入固定化NAD激酶，催化合成NADP；(2)去除第一反應液中的固定化NAD激酶，繼續(xù)加入葡萄糖配制成第二反應液，向第二反應液中加入固定化葡萄糖脫氫酶，催化合成NADPH。上述方法實現(xiàn)了以連續(xù)反應合成NADPH，生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品質(zhì)量更加穩(wěn)定；另一方面，采用固定化酶催化制備NADPH，固定化酶能夠連續(xù)、反復多次使用，進一步降低了生產(chǎn)成本，避免了產(chǎn)物中引入蛋白雜質(zhì)，固定化酶應用于上述方法中有利于生產(chǎn)高純度和高收率的NADPH。

1.一種固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）在二價金屬離子存在下，以NAD和偏磷酸鹽為底物配制成第一反應液，向所述第一反應液中加入固定化NAD激酶，催化合成NADP；（2）濾除所述第一反應液中的固定化NAD激酶，加入葡萄糖配制成第二反應液，向所述第二反應液中加入固定化葡萄糖脫氫酶，催化合成NADPH。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述二價金屬離子為鎂離子，所述NAD、所述偏磷酸鹽和所述鎂離子以1：（1~20）：（0.025~2.5）的質(zhì)量比混和于溶劑中，所述溶劑與所述NAD的質(zhì)量比為（10~100）：1，形成所述第一反應液。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述固定化NAD激酶與所述NAD的質(zhì)量比為（1~20）：1。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述NADP合成的反應條件為：調(diào)節(jié)pH為4~8，在25℃~55℃的溫度下反應10~40小時。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，按照所述葡萄糖與所述NAD的摩爾比為（0.1~5）：1加入所述葡萄糖后，補充加入溶劑，至所述溶劑與所述NAD的質(zhì)量比為（10~100）：1，形成所述第二反應液。6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述固定化葡萄糖脫氫酶與所述NAD的質(zhì)量比為（0.1~5）：1。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或5所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述NADPH合成的反應條件為：調(diào)節(jié)pH為6~9，在5℃~35℃的溫度下反應至pH保持穩(wěn)定。8.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述溶劑為純化水或包括磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和磷酸二氫鈉中至少一種的水溶液。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或5所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，還包括將所述NAD激酶和葡萄糖脫氫酶固定化的方法：a. 將酶載體用質(zhì)量濃度為1-3%的戊二醛活化后過濾，作為固定化載體；b. 分別將固定化載體加入NAD激酶和葡萄糖脫氫酶的酶液中，調(diào)節(jié)pH為5~9，在10℃~30℃下緩慢攪動，固定18~36小時得到固定化NAD激酶和固定化葡萄糖脫氫酶。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述NAD激酶與所述酶載體的質(zhì)量為比1:5，所述葡萄糖脫氫酶與所述酶載體的質(zhì)量為比1:5。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，固定所述NAD激酶的酶載體為LX-1000HFA，固定所述葡萄糖脫氫酶的酶載體為LX-1000NH。12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，還包括NAD激酶和葡萄糖脫氫酶的制備方法：1）分別發(fā)酵培養(yǎng)所述NAD激酶的生產(chǎn)菌和所述葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)菌，發(fā)酵結(jié)束后收集菌體，將收集的菌體破碎后得到NAD激酶的粗酶液和葡萄糖脫氫酶的粗酶液；2）將步驟1）中得到的粗酶液進行絮凝，然后過濾所述粗酶液，得到純化的NAD激酶的酶液和葡萄糖脫氫酶的酶液。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的固定化酶催化合成NADPH的方法，其特征在于，所述NAD激酶的生產(chǎn)菌為克隆有SEQ ID NO.1所示基因的大腸桿菌基因工程菌，所述葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)菌為克隆有SEQ ID NO.2所示基因的大腸桿菌基因工程菌。