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新型微生物、麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶及其制造方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-02-21
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200480019106.0 
  • 技術(專利)名稱 新型微生物、麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶及其制造方法 
  • 項目單位 獨立行政法人海洋研究開發(fā)機構
  • 發(fā)明人 日高祐子,秦田勇二,伊藤進,掘越弘毅,吉田雅浩,中村信之,高田正保,中久喜輝夫 
  • 行業(yè)類別 藥品-生物藥品
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳若恩
  • 發(fā)布時間 2022-02-21  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明提供新型類芽孢桿菌屬微生物、新型麥芽糖磷酸化酶、以及新型海藻糖磷酸化酶,所述新型類芽孢桿菌屬微生物具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶的能力;所述新型麥芽糖磷酸化酶僅作用于麥芽糖,對麥芽糖中的α-1,4-吡喃葡萄糖苷鍵進行可逆性加磷酸分解;所述新型海藻糖磷酸化酶僅作用于海藻糖,對海藻糖中的α-1,4-吡喃葡萄糖苷鍵進行可逆性加磷酸分解。本發(fā)明還提供上述新型麥芽糖磷酸化酶以及新型海藻糖磷酸化酶的制造方法。與以往的方法相比,采用該制造方法容易獲得所述的酶,還能夠大幅度地縮短培養(yǎng)時間;所得酶具有較高的溫度穩(wěn)定性,而且兩種酶具有幾乎相同的最適pH范圍。
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  • 02

    說明書

    1.具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶的能力的微生物,該微生物是保藏在獨立行政法人產業(yè)技術綜合研究所特許生物保藏中心的保藏號為FERM?BP-8420的類芽孢桿菌sp.SH-55(paenibacillus?sp.SH-55)。2.來源于類芽孢桿菌屬微生物的麥芽糖磷酸化酶,其氨基酸序列為序列號1所示的序列,并且所述麥芽糖磷酸化酶具有下述理化性質:(I)作用:對麥芽糖中的α-1,4-吡喃葡萄糖苷鍵進行可逆性加磷酸分解,生成葡萄糖和β-D-葡萄糖1-磷酸;(II)分解反應的底物特異性:作用于麥芽糖,但不作用于海藻糖、蔗糖、乳糖和纖維二糖等;(III)最適pH及穩(wěn)定pH范圍:分解反應的最適pH為7.0~8.0,合成反應的最適pH為5.5~6.5;于50℃加熱10分鐘的加熱條件下,在pH?5.5~7.5的范圍內穩(wěn)定;(IV)作用溫度的范圍和最適溫度:作用溫度范圍為20℃~60℃;分解反應的最適溫度為45℃~55℃,合成反應的最適溫度為50℃~55℃;(V)溫度穩(wěn)定性:在pH?6.0加熱15分鐘的加熱條件下,于50℃或50℃以下極其穩(wěn)定;于70℃完全失活;(VI)以SDS-聚丙烯酰胺電泳法測定的分子量約為89000道爾頓~90000道爾頓,以凝膠過濾法測定的分子量約為190000道爾頓;所述酶由同型二聚物構成。3.多核苷酸,其編碼如權利要求2所述的麥芽糖磷酸化酶的氨基酸序列,所述多核苷酸選自下述(a)~(c)組成的組:(a)編碼氨基酸序列如序列表的序列號1所示的多肽的多核苷酸;(c)核苷酸序列如序列表的序列號2所示的多核苷酸。4.重組載體,其具有如權利要求3所述的多核苷酸。5.微生物,其以權利要求4所述的重組載體進行了轉化。6.麥芽糖磷酸化酶或麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶的混合物的制造方法,其特征在于,培養(yǎng)具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶能力的類芽孢桿菌屬微生物,生成并蓄積如權利要求2所述的麥芽糖磷酸化酶,并提取所生成的酶。7.如權利要求6所述的麥芽糖磷酸化酶或麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶混合物的制造方法,其特征在于,在含有麥芽糖的碳源存在下進行所述培養(yǎng),生成并蓄積麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶。8.如權利要求6所述的制造方法,其是麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶混合物的制造方法,其特征在于,在含有海藻糖的碳源存在下進行所述培養(yǎng),優(yōu)先生成并蓄積海藻糖磷酸化酶。9.麥芽糖磷酸化酶的粗酶的制造方法,其是使用如權利要求1所述的特定微生物來制造權利要求2所述的麥芽糖磷酸化酶的粗酶的方法,所述方法選自下述(i)至(iii)中任意一項的方法:(i)培養(yǎng)具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶能力的類芽孢桿菌屬微生物,直接提取從得到的培養(yǎng)液中分離的菌體;(ii)培養(yǎng)具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶能力的類芽孢桿菌屬微生物,從得到的培養(yǎng)液中分離菌體,從分離的菌體中提取麥芽糖磷酸化酶的粗酶;(iii)培養(yǎng)具有生產麥芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶能力的類芽孢桿菌屬微生物,從所得到的培養(yǎng)液中分離菌體,提取培養(yǎng)液的上清液。10.海藻糖的制造方法,其特征在于,在磷酸的存在下,將如權利要求2所述的麥芽糖磷酸化酶以及海藻糖磷酸化酶作用于麥芽糖,以此制造海藻糖。
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專利技術附圖

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