本發(fā)明公開了一種防治煙草黑脛病的青霉菌發(fā)酵液及其制備方法，其中，以馬德里青霉菌(Penicillium madriti)QMYCS?2菌株作為生防菌株，此菌株于2014年11月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.9856；以馬鈴薯液體培養(yǎng)基制備防治煙草黑脛病的青霉菌QMYCS?2菌株發(fā)酵液，馬鈴薯液體培養(yǎng)基為：馬鈴薯200g、葡萄糖10?20g、水1000mL，自然pH。用黑脛病菌接種健康的5?6片真葉期的煙株，接種后24h施用清水稀釋10倍、50倍和100倍(V/V)的馬德里青霉菌QMYCS?2菌株發(fā)酵液，每株施用50mL，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明發(fā)酵液對煙草黑脛病有很好的控制作用，防治效果高達(dá)76.92?93.18％。

1.一種防治煙草黑脛病的青霉菌發(fā)酵液的制備方法，其特征在于，
以馬德里青霉QMYCS-2菌株作為生防菌，此菌株于2014年11月14日保藏于中國微生物
菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.9856；
以馬鈴薯液體培養(yǎng)基、燕麥片液體培養(yǎng)基或查彼液體培養(yǎng)基制備防治煙草黑脛病的馬
德里青霉QMYCS-2菌株發(fā)酵液，所述馬德里青霉QMYCS-2菌株為菌種保藏號為CGMCC
NO.9856所保藏的菌株；
所述馬鈴薯液體培養(yǎng)基為：馬鈴薯200g、葡萄糖10-20g、蒸餾水1000ml，自然pH；
所述燕麥片液體培養(yǎng)基為：30g燕麥片，1000mL水，自然pH，
所述查彼液體培養(yǎng)基為：NaNO₃2g，K₂HPO₄1g，KCl 0.5g，MgSO₄0.5g，F(xiàn)eSO₄0.01g，蔗糖
30g，水1000ml，自然pH；
QMYCS-2菌株16S rDNA序列表：567bp：


2.一種防治煙草黑脛病的青霉菌發(fā)酵液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
A、以馬德里青霉菌QMYCS-2菌株作為生防菌株，此菌株于2014年11月14日保藏于中國
微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.9856；
B、在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)馬德里青霉菌QMYCS-2菌株；
C、從燕麥片培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d的馬德里青霉菌QMYCS-2菌株的菌落邊緣取直徑為5mm菌
餅，將該菌餅接種于含100mL馬鈴薯液體培養(yǎng)基、容量為250mL的三角瓶中，28℃，180rpm振
蕩培養(yǎng)15-20d；
D、紗布過濾除去菌絲體，再經(jīng)8000r/分鐘離心5分鐘，鏡檢無細(xì)胞，獲得發(fā)酵液；
E、用生物測定的方法確定發(fā)酵液活性；
F、確定發(fā)酵液具有生物活性后，用清水將發(fā)酵液稀釋10倍、50倍和100倍(V/V)；用于防
治煙草黑脛病。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種防治煙草黑脛病的青霉菌發(fā)酵液的制備方法，其特征在于，
步驟B在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)馬德里青霉菌QMYCS-2菌株；燕麥片瓊脂培養(yǎng)基：30g燕麥
片，瓊脂15～20g，1000mL水，自然pH。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種防治煙草黑脛病的青霉菌發(fā)酵液的制備方法，步驟E用生物
測定的方法確定發(fā)酵液活性，具體為：取經(jīng)0.2μm細(xì)菌過濾器滅菌的發(fā)酵液與燕麥片瓊脂培
養(yǎng)基按1∶10(V/V)混合，然后取18mL倒入直徑85mm的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。在該培養(yǎng)皿的中央接種
直徑為5mm的黑脛病菌菌餅，該黑脛病菌菌餅取自燕麥片瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d的煙草黑脛
病菌菌落邊緣。接種后將培養(yǎng)皿置于28℃黑暗恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24h后十字交叉法測量
菌落直徑，并計(jì)算菌絲生長的抑制率，抑制率達(dá)到60％認(rèn)為發(fā)酵液有生物活性。