一種甲羥孕酮人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以甲羥孕酮為原料，通過(guò)氫氧化鉀和二溴乙酸進(jìn)行取代，得到甲羥孕酮半抗原，利用混合酸酐法將其與載體蛋白BSA偶聯(lián)，得到甲羥孕酮人工抗原。本發(fā)明成功的合成甲羥孕酮人工抗原，合成過(guò)程簡(jiǎn)單，抗原產(chǎn)物暴露了孕激素共同結(jié)構(gòu)，為以后篩選群選性甲羥孕酮單克隆抗體奠定基礎(chǔ)，得到的群選性單克隆抗體可以滿足國(guó)內(nèi)對(duì)孕激素多重檢測(cè)的需求。

1.一種甲羥孕酮人工抗原的合成方法，其特征在于以甲羥孕酮為原料，通過(guò)氫氧化鉀
和二溴乙酸進(jìn)行取代，得到甲羥孕酮半抗原，利用混合酸酐法將其與載體蛋白BSA或OVA偶
聯(lián)，得到甲羥孕酮人工抗原；
具體合成步驟：
（1）甲羥孕酮半抗原的制備：取甲羥孕酮0.1mmol溶解于3mL無(wú)水二甲亞砜中為A液，二
溴乙酸0.2mmol溶解于1.4mL無(wú)水二甲亞砜中為B液，A液中加入氫氧化鉀粉末1.5mmol，室溫
條件下攪拌至溶液顏色變?yōu)槲ⅫS色，將B液逐滴加入到A液中，黃色逐漸加深，溴取代甲羥孕
酮17位羥基上的H鍵，室溫反應(yīng)4h，用50mL冰水終止反應(yīng)，乙酸乙酯萃取三遍，合并水相，將
水相用2mol/L鹽酸酸化得黃色沉淀，水洗四遍至中性，干燥后得到黃色甲羥孕酮半抗原粉
末；
（2）甲羥孕酮人工抗原的制備：稱(chēng)取甲羥孕酮半抗原0.01mmol溶解于600μL無(wú)水N,N-二
甲基甲酰胺DMF中，置于4℃冰浴中攪拌，溶液預(yù)冷后加入0.025mmol三正丁胺，冰浴條件攪
拌30min，加入0.025mmol氯甲酸異丁酯，繼續(xù)冰浴攪拌1h，得活化后小分子溶液C液；稱(chēng)取載
體蛋白BSA 10.6mg，溶解于pH 9.6的碳酸鹽緩沖液CBS中，得蛋白溶液；在冰浴條件下，將小
分子溶液C液逐滴滴加到蛋白溶液中，反應(yīng)8h；反應(yīng)結(jié)束后，將溶液離心，取上清，得到甲羥
孕酮人工抗原混合液；
剪取透析袋煮沸消毒，將甲羥孕酮人工抗原混合液移入到透析袋中，用0.01M pH 7.4
的磷酸鹽緩沖液PBS透析三天，期間每天換液三次，透析結(jié)束后取出甲羥孕酮人工抗原分裝
在1mL的無(wú)菌的離心管，在-20℃保存，備用；該甲羥孕酮人工抗原，即甲羥孕酮半抗原-BSA，
作為免疫原；
將載體蛋白由BSA換為OVA，方法不變，合成的甲羥孕酮人工抗原，即甲羥孕酮半抗原-
OVA，作為包被原。