本發(fā)明公開了一種動物病原微生物假病毒載體及其制備技術(shù)。本發(fā)明將MS2噬菌體的成熟酶蛋白和外殼蛋白的基因編碼序列以及其基因組部分包含基因調(diào)節(jié)元件序列的5′非編碼序列相應(yīng)的cDNA序列連接到pTrcHis2A載體啟動子的下游，構(gòu)建了前假病毒載體。然后通過基因插入方法，將MS2噬菌體中外殼蛋白的第15-16個氨基酸之間加入6His純化標(biāo)簽，這樣含外源基因的假病毒顆粒表達(dá)后為RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體，利用純化蛋白方法捕獲假病毒顆粒，可以減化假病毒顆粒制備的繁瑣操作過程，同時提高假病毒顆粒純化的質(zhì)量。本發(fā)明假病毒載體為pTrcMS，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

1.一種假病毒載體，其特征在于，包括出發(fā)載體的啟動子序列和終止子序列，MS2噬菌體成熟酶蛋白基因編碼序列、突變的外殼蛋白基因編碼序列、部分裂解蛋白和復(fù)制酶基因編碼序列，出發(fā)載體一個末端的多克隆位點序列，所述的突變的外殼蛋白基因編碼序列是在位于MS2噬菌體的外殼蛋白基因編碼序列的第15-16個氨基酸之間，插入6His標(biāo)簽，核苷酸序列為CATCACCATCACCATCAC，所述的出發(fā)載體為pTrcHis2A，該假病毒載體為pTrcMS，核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。?2.一種權(quán)利要求1所述假病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：?1）在pTrcHis?2A載體多克隆位點的NcoI和BglII雙酶切位點處插入噬菌體MS2的基因片段，得到前假病毒載體pTrcHis-MS2；?2）通過基因插入方法將載體pTrcHis-MS2中外殼蛋白基因編碼序列的第15-16個氨基酸之間插入6His序列，構(gòu)建得到假病毒載體；?3）假病毒載體pTrcMS用His柱進(jìn)行純化。?3.如權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟2）是以前假病毒載體pTrcHis-MS2為模板，以兩對含有突變基因的PCR引物對為引物，分別進(jìn)行PCR擴增反應(yīng)，回收純化擴增產(chǎn)物；用XhoI和Hind?III雙酶切前假病毒載體pTrcHis-MS2；兩次PCR的擴增產(chǎn)物與酶切后的pTrcHis-MS2連接，轉(zhuǎn)化受體菌，經(jīng)篩選，誘導(dǎo)表達(dá)，鑒定得到假病毒載體pTrcMS。?4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的含有突變基因的PCR引物對，其核苷酸序列為：?Primer1-F:5’-AGGTAACATGCTCGAGGGCCTT-3’，?Primer1-R:5’-GACATCACCATCACCATCACACTGGCGACGTGGCTGTCGCCCCA-3’；?Primer2-F:5’-GTGTGATGGTGATGGTGATGTCCGCCATTGTCGACGAGAACG-3’，?Primer2-R:5’-GTTCGGGCCCAAGCTTCGAATTCCC-3’。?5.一種假病毒顆粒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述假病毒載體pTrcMS及其攜帶有外源基因的噬菌體基因組。?6.一種假病毒顆粒的制備方法，其特征在于，將外源基因克隆于權(quán)利要求1所述假病毒載體pTrcMS中的MS2噬菌體外殼蛋白基因編碼序列下游，在其下游插入終止子，轉(zhuǎn)錄后得到帶有噬菌體操縱子RNA序列的外源基因RNA轉(zhuǎn)錄本，誘導(dǎo)表達(dá)噬菌體外殼蛋白并組裝成蛋白外殼，并將攜帶有外源基因的噬菌體基因組包裹到包膜內(nèi)，得到假病毒顆粒。?