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一種免疫親和純化洗脫液的篩選方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-08
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710039621.4 
  • 技術(專利)名稱 一種免疫親和純化洗脫液的篩選方法 
  • 項目單位 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
  • 發明人 饒微,戚永躍,陳天貴,葉蕾蕾,徐紅 
  • 行業類別 智慧健康-健康大數據
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 衛丕雄
  • 發布時間 2022-01-08  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種免疫親和純化洗脫液的篩選方法,包括如下步驟:將第一配體、第二配體和磁球混合反應得到第一免疫磁球復合物;采用洗脫液對第一免疫磁球復合物進行洗脫,對得到的第二免疫磁球復合物進行免疫測定獲得免疫數據,若不超過第一閾值,則判定為第一篩選洗脫液;采用第一篩選洗脫液對第一免疫磁球復合物進行多次洗脫,對得到的第三免疫磁球復合物進行免疫測定獲得免疫數據,若超過第二閾值,則判定為第二篩選洗脫液;采用第二篩選洗脫液對第二配體進行放大檢測獲得免疫數據,若超過第三閾值,則判定為第三篩選洗脫液。這種免疫親和純化洗脫液的篩選方法采用磁球作為固相載體,磁球在洗脫過程中分散性好,假陽性率低,可靠性高。
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  • 02

    說明書

    1.一種免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,包括如下步驟:將第一配體和磁球混合反應,接著加入第二配體,反應后得到第一免疫磁球復合物,其中,所述第一配體可與所述第二配體特異性結合;所述磁球為Fe2O3磁性納米粒子與有機高分子材料的復合體,或者,所述磁球為Fe3O4磁性納米粒子與有機高分子材料的復合體;并且所述磁球通過表面改性而帶有一種或多種活性功能基團;采用洗脫液對所述第一免疫磁球復合物進行洗脫,沉降后得到第二免疫磁球復合物;對所述第二免疫磁球復合物進行免疫測定,獲得所述第二免疫磁球復合物中的所述第二配體的免疫數據,若所述第二免疫磁球復合物中的所述第二配體的免疫數據小于或等于第一閾值,則判定所述洗脫液為第一篩選洗脫液;采用所述第一篩選洗脫液對所述第一免疫磁球復合物進行多次洗脫,沉降后得到第三免疫磁球復合物;對所述第三免疫磁球復合物進行免疫測定,獲得所述第三免疫磁球復合物中的所述第一配體的免疫數據,若所述第三免疫磁球復合物中的所述第一配體的免疫數據大于或等于第二閾值,則判定所述第一篩選洗脫液為第二篩選洗脫液;將所述第一配體與凝膠偶聯,接著加入所述第二配體,反應后得到凝膠復合物;采用所述第二篩選洗脫液對所述凝膠復合物進行洗脫,沉降后收集洗脫后的混合液,接著對所述混合液進行免疫測定,獲得所述混合液中的所述第二配體的免疫數據,若所述混合液中的所述第二配體的免疫數據大于或等于第三閾值,則判定所述第二篩選洗脫液為第三篩選洗脫液;所述第一閾值為采用陰性洗脫液對第一免疫磁球復合物進行洗脫做對照組測得的免疫數據的5%~20%;所述第二閾值為采用陰性洗脫液對第一免疫磁球復合物進行多次洗脫做對照組測得的免疫數據的80%~100%;所述第三閾值為采用所述第二配體的標準品溶液做對照組測得的免疫數據的80%~100%。2.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述得到第一免疫磁球復合物的反應過程為:將所述第一配體、所述磁球和交聯劑在緩沖液中混合反應,再加入所述第二配體,反應后得到第一免疫磁球復合物。3.根據權利要求2所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述交聯劑為、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、1-環己基-3-(2-嗎啉代乙基)-碳二亞胺對甲苯甲磺酸。4.根據權利要求2所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述緩沖液為pH為3~4的醋酸鹽緩沖液、pH為2~4的甘氨酸鹽酸緩沖液或pH為9~11的碳酸鹽緩沖液。5.根據權利要求1或2所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述第一配體為甲狀腺過氧化物酶、谷氨酸脫羧酶、促甲狀腺激素受體、蛋白酪氨酸磷酸酶、胃泌素17或抗繆勒氏管激素,所述第二配體為甲狀腺過氧化物酶抗體、谷氨酸脫羧酶抗體、促甲狀腺激素受體抗體、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體、胃泌素17抗體或抗繆勒氏管激素抗體;或者,所述第一配體為甲狀腺過氧化物酶抗體、谷氨酸脫羧酶抗體、促甲狀腺激素受體抗體、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體、胃泌素17抗體或抗繆勒氏管激素抗體,所述第二配體為甲狀腺過氧化物酶、谷氨酸脫羧酶、促甲狀腺激素受體、蛋白酪氨酸磷酸酶、胃泌素17或抗繆勒氏管激素。6.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,在所述采用洗脫液對所述第一免疫磁球復合物進行洗脫的操作之前,還包括采用淋洗液對所述第一免疫磁球復合物進行淋洗的步驟。7.根據權利要求6所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述淋洗液為pH為7~8且濃度為300mM~500mM的NaCl的緩沖液。8.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述洗脫液選自酸性洗脫液、堿性洗脫液、含有鹽類的洗脫液和含有中性去垢劑的洗脫液中的至少一種。9.根據權利要求8所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述酸性洗脫液的pH為2~4.5。10.根據權利要求8所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述堿性洗脫液的pH為10~12.5。11.根據權利要求8所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述含有鹽類的洗脫液中含有1mol/L~5mol/L的硫氰酸鹽、2mol/L~5mol/L的胍、2mol/L~8mol/L的尿素、3mol/L~5mol/L的MgCl2和5mol/L~10mol/L的LiCl中的至少一種。12.根據權利要求8所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述含有中性去垢劑的洗脫液含有質量百分數為25%~50%的乙二醇、質量百分數為5%~20%的二氧六環和質量百分數為5%~10%的Triton X-100中的至少一種。13.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述采用所述第一篩選洗脫液對所述第一免疫磁球復合物進行多次洗脫的操作中,所述多次為5次~30次。14.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述磁球的粒徑為0.1μm~5μm。15.根據權利要求1所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述對所述第二免疫磁球復合物進行免疫測定的操作包括:加入標記有示蹤標記物的第三配體進行免疫檢測,其中,所述第三配體與所述第二配體特異性結合。16.根據權利要求15所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述示蹤標記物選自金剛烷、魯米諾、異魯米諾、異魯米諾衍生物、吖啶酯、堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶中的至少一種。17.根據權利要求16所述的免疫親和純化洗脫液的篩選方法,其特征在于,所述異魯米諾衍生物為N-(4-氨丁基)-N-乙基異魯米諾。
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專利技術附圖

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