本發明涉及一種熒光定量RT-PCR檢測融合基因E2A-PBX1 mRNA表達的試劑盒，特別是涉及以一步法實時熒光逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術快速、定量檢測融合基因E2A-PBX1的試劑盒。本試劑盒具有很高的靈敏度和特異性，通過本發明的試劑盒實現對外周血或骨髓中融合基因E2A-PBX1 mRNA進行定量檢測，檢測急性淋巴細胞白血病(ALL)等血液系統腫瘤中融合基因E2A-PBX1的mRNA表達水平，以有利于評價患者化療效果、預后及對微小殘留病變復發的監測。

1.一種熒光定量RT-PCR檢測融合基因E2A-PBX1mRNA表達的試劑盒，試劑盒包括：(1)
RNA提取試劑、E2A-PBX1反應液、TBP反應液、RT-PCR酶系、E2A-PBX1陽性定量參考品1-4、
TBP陽性定量參考品1-4和陰性質控品，和(2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，
其特征在于E2A-PBX1反應液中正向和反向引物分別是：
5’-ACCCTCCCTGACCTGTCTC-3’(SEQ?ID?NO：1)
5’-GCCTTCCGCTAACAGCATG-3’(SEQ?ID?NO：2)
E2A-PBX1反應液中寡核苷酸探針是5’-X-ACTCAAAACACTGTAGGAGTCGGGAGG-Y-3’，其中X
表示的是熒光發生基團，Y表示的是熒光淬滅基團；
TBP反應液中正向和反向引物分別是5’-CGTGGCTCTCTTATCCTCATGA-3’(SEQ?ID?NO：4)
和5’-GCCCGAAACGCCGAATATA-3’(SEQ?ID?NO：5)；
TBP反應液中寡核苷酸探針是5’-X-CCGCAGCAAACCGCTTGGG-Y-3’，其中X表示的是熒光
發生基團，Y表示的是熒光淬滅基團；
E2A-PBX1陽性定量參考品1-4均為含有E2A-PBX1目的片段的重組質粒，濃度為2×10³
拷貝/μl-2×10⁶拷貝/μl；
TBP陽性定量參考品1-4均為含有TBP目的片段的重組質粒，濃度為2×10³拷貝/μl
-2×10⁶拷貝/μl。
2.根據權利要求1的試劑盒，E2A-PBX1反應液和TBP反應液中的PCR緩沖液包含10
mmol/L?Tris-HCl、50mmol/L?KCl和3.0mmol/L?MgCl₂。
3.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于PCR擴增的最佳反應溫度和時間為：50℃逆
轉錄15min，1個循環；95℃15min，1個循環；最后94℃15s，55℃45s，40個循環收集
熒光信號。