本發明提供用于檢測細胞NKD2基因啟動子區甲基化狀態的引物對及試劑盒。本試劑盒首次選用細胞NKD2基因作為目標基因，該基因是本發明人應用MSP技術率先在胃癌細胞系及腫瘤組織中篩選出的啟動子區呈高甲基化狀態的基因，具有首創性。利用本發明所述試劑盒及特異性引物對檢測胃癌腫瘤組織甲基化狀態的特異性好，可達到46％；靈敏度高，達到5‰，即1000個細胞中有5個甲基化的細胞就能夠被檢測出。應用本發明試劑盒來檢測細胞NKD2基因啟動子區高甲基化狀態可作為胃癌診斷、療效觀察、預后判斷、殘留病灶及復發檢測等的有力手段，而且，操作簡便、穩定性好，具有深遠的臨床意義和推廣性。

1.一種用于檢測細胞NKD2基因啟動子區甲基化狀態的引物對，
其特征在于，包括甲基化引物和非甲基化引物，其中，所述甲基化引
物的上游引物核苷酸序列為：
5’-GATCGTAGGGGATAGTTTCGTGGC-3’，下游引物核苷酸序列為：
5’-AAAACAACTCTAACACCGCTCCCCG-3’；所述非甲基化引物的上
游引物核苷酸序列為：5’-TGGATTGTAGGGGATAGTTTTGTGGT-3’，
下游引物核苷酸序列為：
5’-CAAAAACAACTCTAACACCACTCCCCA-3’。
2.一種檢測胃癌細胞的試劑盒，其特征在于：含有權利要求1中
所述的甲基化引物和非甲基化引物。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：還含有甲基化對
照MSP模板，該模板為硫化修飾后的細胞NKD2基因啟動子區100%
甲基化的癌細胞DNA。
4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：還含有非甲基化
對照MSP模板，該模板為硫化修飾后的細胞NKD2基因啟動子區100%
非甲基化的正常細胞DNA。
5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：還含有作為雙陰
性系統對照的ddH₂O。
6.根據權利要求2至5任一項所述的試劑盒，其特征在于：還含
有MSP反應所需的下列成分：50mM?MgCl₂，10×MSP?buffer，10mM?
dNTP?mixture，Hot?start?Taq酶。