本發(fā)明涉及用于檢測(cè)基因融合突變的引物/探針組合、試劑盒及其使用方法。其中，所述引物/探針組合包括下組中的至少一種、兩種或三種：用于檢測(cè)ALK基因融合突變的引物/探針組1，所述引物/探針組1包括引物1～8和探針1～2；用于檢測(cè)RET基因融合突變的引物/探針組2，所述引物/探針組2包括引物9～13和探針3；用于檢測(cè)ROS1基因融合突變的引物/探針組3，所述引物/探針組3包括引物14～21和探針4～6。本發(fā)明所述引物/探針組合、試劑盒及其使用方法能夠?qū)崿F(xiàn)在單一檢測(cè)孔中同時(shí)檢測(cè)cfRNA樣本中ALK基因9種融合突變，或RET基因4種融合突變，或ROS1基因的9種融合突變，具有特異性好、靈敏度高，檢測(cè)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

1.用于檢測(cè)基因融合突變的引物/探針組合，其特征在于，所述引物/探針組合包括：用于檢測(cè)ALK基因融合突變的引物/探針組1，所述引物/探針組1包括引物1～8和探針1～2，其中，所述引物1～8的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.19～20、30～31、23、32、25、27所示，所述探針1～2的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.28～29所示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物/探針組合，其特征在于，所述引物/探針組合還包括：用于檢測(cè)RET基因融合突變的引物/探針組2，所述引物/探針組2包括引物9～13和探針3，其中，所述引物9～13的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.33～37所示，所述探針3的核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示；用于檢測(cè)ROS1基因融合突變的引物/探針組3，所述引物/探針組3包括引物14～21和探針4～6，其中，所述引物14～21的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.39～43、45～46、48所示，所述探針4～6的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.44、47、49所示。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物/探針組合，其特征在于，所述引物/探針組合還包括用于檢測(cè)HPRT1基因的引物/探針組4，所述引物/探針組4包括引物22～23和探針7，其中，所述引物22～23的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.13～14所示，所述探針7的核苷酸序列如SEQ IDNO.15所示。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物/探針組合，其特征在于，所述探針1～2標(biāo)記有熒光標(biāo)記A。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的引物/探針組合，其特征在于，所述探針7標(biāo)記有熒光標(biāo)記B，所述熒光標(biāo)記A與所述熒光標(biāo)記B不同。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的引物/探針組合，其特征在于，所述熒光標(biāo)記A為FAM，所述熒光標(biāo)記B為VIC。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物/探針組合，其特征在于，所述引物/探針組合還包括用于檢測(cè)HPRT1基因的引物/探針組4，所述引物/探針組4包括引物22～23和探針7；其中，所述引物22～23的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.13～14所示，所述探針7的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的引物/探針組合，其特征在于，所述探針1～2、所述探針3和/或所述探針4～6標(biāo)記有熒光標(biāo)記A。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的引物/探針組合，其特征在于，所述探針7標(biāo)記有熒光標(biāo)記B，所述熒光標(biāo)記A與所述熒光標(biāo)記B不同。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的引物/探針組合，其特征在于，所述熒光標(biāo)記A為FAM，所述熒光標(biāo)記B為VIC。11.根據(jù)權(quán)利要求1～10任一項(xiàng)所述的引物/探針組合，其特征在于，每組中各引物與各探針的摩爾比均為(5～15):(2～3)。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的引物/探針組合，其特征在于，每組中各引物與各探針的摩爾比為4:1。13.一種用于檢測(cè)基因融合突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1～12任一項(xiàng)所述的引物/探針組合。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括其他輔助檢測(cè)試劑。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述試劑盒，其特征在于，所述其他輔助檢測(cè)試劑包括以下一種或者多種：Taq酶、dNTPs、緩沖液、水、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述試劑盒，其特征在于，所述Taq酶、dNTPs和緩沖液混合為單試劑。17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述試劑盒，其特征在于，所述緩沖液中包括Tris·Cl、K⁺和Mg²⁺。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述試劑盒，其特征在于，所述K⁺由KCl提供，所述Mg²⁺由MgSO₄和MgCl₂提供。19.權(quán)利要求1～12任一項(xiàng)所述的引物/探針組合或權(quán)利要求13～18任一項(xiàng)所述試劑盒的非診斷使用方法，其特征在于，所述方法包括：(1)使用權(quán)利要求1～12任一項(xiàng)所述的引物/探針組合或權(quán)利要求13～18任一項(xiàng)所述試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行數(shù)字PCR反應(yīng)；(2)根據(jù)所述數(shù)字PCR的擴(kuò)增結(jié)果，判讀樣本是否發(fā)生基因融合突變。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的使用方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR的反應(yīng)體系包括：500nM～1500nM引物1～8和200～300nM探針1～2；和/或，500nM～1500nM引物22～23和200～300nM探針7。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的使用方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR的反應(yīng)體系包括：1000nM所述引物1～8和250nM所述探針1～2；和/或，1000nM引物22～23和250nM探針7；其中，所述引物22～23的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.13～14所示，所述探針7的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的使用方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR的擴(kuò)增程序包括：92～97℃預(yù)變性5～15分鐘；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增階段，92～97℃變性10～60s，50～60℃退火并延伸45～90s，所述擴(kuò)增階段循環(huán)30～50次。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的使用方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR的擴(kuò)增程序包括：所述數(shù)字PCR的擴(kuò)增程序包括：95℃預(yù)變性10分鐘，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增階段，95℃變性30s，55.5℃退火并延伸60s，所述擴(kuò)增階段循環(huán)40次。24.根據(jù)權(quán)利要求19～23任一項(xiàng)所述的使用方法，其特征在于，所述樣本為血清、血漿、尿液、胸腹水或腦脊液。