本發明提供一種快速高效地檢測基因組DNA羥甲基化的方法及試劑盒。該方法包括：用限制性內切酶MspI酶切基因組DNA，得到酶切片段；在所述酶切片段的兩端分別連接P5接頭和P7接頭，得到加接頭的酶切片段；對所述加接頭的酶切片段進行糖基化處理，使其中的羥甲基化堿基轉化為糖基羥甲基化堿基，得到包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段；將所述包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段再次用限制性內切酶MspI酶切，得到二次酶切產物；對所述二次酶切產物進行PCR擴增，得到測序用DNA文庫；以及，對所述測序用DNA文庫進行二代測序。與傳統的RRHP方法相比，該方法無需使用包含雙脫氧核糖核苷酸的接頭。

1.一種檢測基因組DNA羥甲基化的方法，其是RRHP方法的替代方法，該方法包括：
步驟A：用限制性內切酶MspI酶切基因組DNA，得到酶切片段；
步驟B：在所述酶切片段的兩端分別連接P5接頭和P7接頭，得到加接頭的酶切片段，所
述P5接頭是SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列的退火產物，
所述P7接頭是SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列的退火產
物；
步驟C：對所述加接頭的酶切片段進行糖基化處理，使其中的羥甲基化堿基轉化為糖基
羥甲基化堿基，得到包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段，其中，所述羥甲基化堿基是5-羥甲
基胞嘧啶，所述糖基化處理使用β葡萄糖基轉移酶進行；
步驟D：將所述包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段再次用限制性內切酶MspI酶切，得到
二次酶切產物；
步驟E：對所述二次酶切產物進行PCR擴增，得到測序用DNA文庫；以及
步驟F：對所述測序用DNA文庫進行二代測序，基于測序結果，對所述基因組DNA的羥甲
基化情況進行分析；
該方法不用于人類及動物疾病診斷。
2.一種構建用于檢測基因組DNA羥甲基化的二代測序文庫的方法，其是RRHP方法的替
代方法，該方法包括：
步驟A：用限制性內切酶MspI酶切基因組DNA，得到酶切片段；
步驟B：在所述酶切片段的兩端分別連接P5接頭和P7接頭，得到加接頭的酶切片段，所
述P5接頭是SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列的退火產物，
所述P7接頭是SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列的退火產
物；
步驟C：對所述加接頭的酶切片段進行糖基化處理，使其中的羥甲基化堿基轉化為糖基
羥甲基化堿基，得到包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段，其中，所述羥甲基化堿基是5-羥甲
基胞嘧啶，所述糖基化處理使用β葡萄糖基轉移酶進行；
步驟D：將所述包含糖基羥甲基化堿基的酶切片段再次用限制性內切酶MspI酶切，得到
二次酶切產物；以及
步驟E：對所述二次酶切產物進行PCR擴增，得到二代測序用DNA文庫。
3.根據權利要求2所述的方法，其中，在所述步驟D和步驟E之間還包括：
步驟G：對二次酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，并回收110bp-500bp大小的片段。
4.根據權利要求2所述的方法，其中，在所述步驟A與步驟B之間、步驟B與步驟C之間、步
驟C與步驟D之間、和/或步驟E之后還包括純化步驟。
5.根據權利要求2所述的方法，其中，所述二代測序采用Illumina測序平臺進行。
6.一種用于檢測基因組DNA羥甲基化的試劑盒，其包括：
SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列、或它們的退火產
物；
SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列、或它們的退火產
物；以及
用于RRHP方法的試劑，所述用于RRHP方法的試劑選自MspI酶、MspI酶切反應緩沖液、β
葡萄糖基轉移酶、β葡萄糖基轉移酶反應緩沖液、Taq酶、PCR反應緩沖液、以及用于Illumina
平臺測序的試劑；
但，該試劑盒不包括包含雙脫氧核糖核苷酸的接頭。