本發明公開了一種錨定巢式多重PCR富集DNA目標區域的方法和試劑盒，該方法包括：將DNA進行末端修復和接頭序列的連接，其中接頭序列包括互補的長序列和短序列，長序列在靠近連接端處與短序列互補，其它部分中包含一段標簽序列；對連接產物進行第一輪多重PCR反應，其中上游引物為其至少一部分與標簽序列相同的錨定引物，下游引物包括多條特異性結合到目標區域上的序列；對第一輪多重PCR反應得到的產物進行第二輪多重PCR反應，其中上游引物為錨定引物，下游引物包括多條5’?端具有測序引物序列、3’?端特異性結合到目標區域上的序列，最后得到目標區域文庫。本發明的方法具有快速、低成本和高通量的特點。

1.一種錨定巢式多重PCR富集DNA目標區域的方法，其特征在于，所述方法包括：將待目標區域富集的DNA進行末端修復和接頭序列的連接，其中所述接頭序列包括互補的長序列和短序列，所述長序列在靠近連接端處與所述短序列互補，所述長序列的其它部分中包含一段標簽序列；對連接所述接頭序列的產物進行第一輪多重PCR反應，其中上游引物為錨定引物，下游引物為多重PCR引物組一，所述錨定引物的至少一部分與所述標簽序列相同，所述多重PCR引物組一包括多條特異性結合到所述目標區域上的序列；對所述第一輪多重PCR反應得到的產物進行第二輪多重PCR反應，其中上游引物為所述錨定引物，下游引物為多重PCR引物組二，所述多重PCR引物組二包括多條5’-端具有測序引物序列、3’-端特異性結合到所述目標區域上的序列，最后得到兩端分別具有所述標簽序列和所述測序引物序列的目標區域文庫。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多重PCR引物組一的序列與所述多重PCR引物組二的特異性結合到所述目標區域上的序列相同。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標簽序列為5-10個堿基的序列，并且所述標簽序列在不同樣本間為不同序列。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述末端修復后的DNA兩端帶有突出的A堿基，與所述接頭序列的突出的T堿基形成粘末端連接。5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述接頭序列的長序列的3’-端具有所述T堿基、5’-端具有所述標簽序列，所述短序列與所述長序列在靠近所述T堿基處互補。6.一種錨定巢式多重PCR富集DNA目標區域的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如下組成部分：接頭序列，所述接頭序列包括互補的長序列和短序列，所述長序列在靠近連接端處與所述短序列互補，所述長序列的其它部分中包含一段標簽序列，所述接頭序列用于連接到末端修復后的待目標區域富集的DNA兩端；錨定引物，所述錨定引物的至少一部分與所述標簽序列相同，用于作為第一輪多重PCR反應和第二輪多重PCR反應的上游引物；多重PCR引物組一，所述多重PCR引物組一包括多條特異性結合到所述目標區域上的序列，用于作為所述第一輪多重PCR反應的下游引物；多重PCR引物組二，所述多重PCR引物組二包括多條5’-端具有測序引物序列、3’-端特異性結合到所述目標區域上的序列，用于作為所述第二輪多重PCR反應的下游引物。7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述多重PCR引物組一的序列與所述多重PCR引物組二的特異性結合到所述目標區域上的序列相同。8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述標簽序列為5-10個堿基的序列，并且所述標簽序列在不同樣本間為不同序列。9.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述接頭序列具有突出的T堿基，與所述末端修復后的DNA兩端的突出的A堿基形成粘末端連接。10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述接頭序列的長序列的3’-端具有所述T堿基、5’-端具有所述標簽序列，所述短序列與所述長序列在靠近所述T堿基處互補。