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穩定化生物學樣本中的核酸的組合物和方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-23
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201580015964.6 
  • 技術(專利)名稱 穩定化生物學樣本中的核酸的組合物和方法 
  • 項目單位 DNA吉諾特克股份有限公司
  • 發明人 H·C·比恩鮑姆,L·波扎,C·A·梅里諾 赫爾南德斯,E·V·杜哈寧 
  • 行業類別 藥品-生物藥品
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 孫兆臨
  • 發布時間 2022-01-23  
  • 01

    項目簡介

    公開了用于穩定化復雜生物學樣本如糞便中存在的人和微生物脫氧核糖核酸(DNA)的方法、組合物和試劑盒。具體地,公開了用于在環境溫度下穩定化生物學樣本中包含的DNA的水性組合物以及采用該水性組合物的相關方法和試劑盒。一方面,組合物包括存在濃度為至少約150mM的螯合劑,并且組合物具有至少約9.5的pH。
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  • 02

    說明書

    1.在環境溫度下穩定化生物學樣本中包含的核酸的方法,包括如下步驟:a)獲得生物學樣本;b)使所述生物學樣本與包括螯合劑的水性組合物接觸以形成混合物,其中所述螯合劑以至少150mM的濃度存在,并且所述螯合劑是1,2-環己二胺四乙酸(CDTA),并且其中所述組合物具有大于9.5的pH;c)均化(b)所述的混合物以形成均勻的混合物;和d)在環境溫度下儲存所述均勻的混合物。2.根據權利要求1所述的方法,其中所述核酸是脫氧核糖核酸(DNA)。3.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述生物學樣本選自糞便樣本、土壤樣本或水樣本。4.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述生物學樣本是污水樣本。5.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述生物學樣本是廢水樣本。6.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本。7.根據權利要求6所述的方法,其中所述哺乳動物是人。8.根據權利要求1或2中任一項所述的方法,其中所述螯合劑的濃度為150mM至500mM。9.根據權利要求1或2中任一項所述的方法,其中所述螯合劑的濃度為250mM至350mM。10.根據權利要求8所述的方法,其中所述螯合劑的濃度為300mM。11.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述組合物的pH為10.5至11.5。12.根據權利要求11所述的方法,其中所述組合物的pH為11。13.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述組合物進一步包括至少一種能夠在pH范圍9.5至11.5內緩沖的緩沖劑。14.根據權利要求13所述的方法,其中所述緩沖劑是β-丙氨酸。15.根據權利要求1或2中任一項所述的方法,其中所述組合物進一步包括水溶性有機溶劑。16.根據權利要求15所述的方法,其中所述水溶性有機溶劑是C1-C6烷醇。17.根據權利要求15所述的方法,其中所述水溶性有機溶劑是乙醇。18.根據權利要求17所述的方法,其中所述乙醇在所述組合物中以小于30體積%的濃度存在。19.根據權利要求18所述的方法,其中所述乙醇在所述組合物中以小于24體積%的濃度存在。20.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述組合物進一步包括洗滌劑。21.根據權利要求20所述的方法,其中所述洗滌劑是十二烷基硫酸鈉。22.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述組合物進一步包括消泡劑。23.根據權利要求22所述的方法,其中所述消泡劑是Antifoam A濃縮物。24.根據權利要求1或2所述的方法,其中利用均化裝置均化所述混合物。25.根據權利要求24所述的方法,其中所述均化裝置是至少一個混合球。26.根據權利要求25所述的方法,其中所述方法包括在包含所述至少一個混合球的樣本容器中形成所述生物學樣本和所述組合物的混合物,密封所述樣本容器,和在所述至少一個混合球存在的情況下通過振蕩所述混合物來均化所述混合物。27.根據權利要求26所述的方法,其中所述振蕩通過手動完成。28.根據權利要求25所述的方法,其中所述至少一個混合球是不銹鋼混合球或碳化鎢混合球。29.根據權利要求28所述的方法,其中所述至少一個混合球是直徑為5.6-11.1mm并且密度為至少7.6g/cm3的不銹鋼混合球。30.根據權利要求29所述的方法,其中所述不銹鋼混合球的直徑為7.1–8.7mm,并且所述樣本容器是內徑為12.9mm的圓底管。31.根據權利要求7所述的方法,其中所述核酸是人DNA。32.根據權利要求31所述的方法,其中所述方法致使所述人DNA:在室溫下穩定至少7天;在37℃至50℃的溫度下穩定至少7天;和/或在-20℃下穩定至少30天。33.根據權利要求31所述的方法,其中所述方法致使所述人DNA在室溫下穩定至少14天。34.根據權利要求31所述的方法,其中所述方法致使所述人DNA在室溫下穩定至少30天。35.根據權利要求31所述的方法,其中所述方法致使所述人DNA在室溫下穩定至少60天。36.根據權利要求31所述的方法,其中所述方法致使所述人DNA在37℃至50℃的溫度下穩定至少14天。37.根據權利要求3所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述生物學樣本的微生物組譜。38.根據權利要求37所述的方法,其中所述方法致使所述生物學樣本的所述微生物組譜在室溫下穩定至少7天;在37℃至50℃的溫度下穩定至少7天;和/或在-20℃下穩定至少30天。39.根據權利要求37所述的方法,其中所述方法致使所述生物學樣本的所述微生物組譜在室溫下穩定至少14天。40.根據權利要求37所述的方法,其中所述方法致使所述生物學樣本的所述微生物組譜在室溫下穩定至少30天。41.根據權利要求37所述的方法,其中所述方法致使所述生物學樣本的所述微生物組譜在室溫下穩定至少60天。42.根據權利要求37所述的方法,其中所述方法致使所述生物學樣本的所述微生物組譜在37℃至50℃的溫度下穩定至少14天。43.根據權利要求1所述的方法,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物包括:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。44.根據權利要求1所述的方法,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物由下列組成:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。45.根據權利要求43所述的方法,其中所述組合物的pH為11,并且包括:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。46.根據權利要求44所述的方法,其中所述組合物的pH為11,并且由下列組成:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。47.根據權利要求43-46中任一項所述的方法,其中所述方法包括在圓底管中形成所述糞便樣本和所述組合物的混合物,所述圓底管的內徑為12.9mm并且包含直徑為5.6-11.1mm并且密度為至少7.6g/cm3的至少一個不銹鋼混合球;密封所述圓底管;和在所述至少一個不銹鋼混合球存在的情況下,通過手動振蕩所述混合物,均化所述混合物。48.根據權利要求47所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述糞便樣本的微生物組譜,其中所述糞便樣本的所述微生物組譜被致使:在室溫下穩定至少7天;在37℃至50℃的溫度下穩定至少7天;和/或在-20℃下穩定至少30天。49.根據權利要求47所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述糞便樣本的微生物組譜,其中所述糞便樣本的所述微生物組譜被致使在室溫下穩定至少14天。50.根據權利要求47所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述糞便樣本的微生物組譜,其中所述糞便樣本的所述微生物組譜被致使在室溫下穩定至少30天。51.根據權利要求47所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述糞便樣本的微生物組譜,其中所述糞便樣本的所述微生物組譜被致使在室溫下穩定至少60天。52.根據權利要求47所述的方法,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述方法穩定化所述糞便樣本的微生物組譜,其中所述糞便樣本的所述微生物組譜被致使在37℃至50℃的溫度下穩定至少14天。53.根據權利要求1所述的方法,其中所述核酸是核糖核酸(RNA)。54.用于在環境溫度下穩定化生物學樣本中包含的核酸的水性組合物,其包括螯合劑,其中所述螯合劑以至少150mM的濃度存在,并且所述螯合劑是1,2-環己二胺四乙酸(CDTA),其中所述組合物具有大于9.5的pH。55.根據權利要求54所述的組合物,其中所述核酸是脫氧核糖核酸(DNA)。56.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述生物學樣本選自糞便樣本、土壤樣本或水樣本。57.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述生物學樣本是污水樣本。58.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述生物學樣本是廢水樣本。59.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本。60.根據權利要求59所述的組合物,其中所述哺乳動物是人。61.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述螯合劑的濃度為150mM至500mM。62.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述螯合劑的濃度為250mM至350mM。63.根據權利要求61所述的組合物,其中所述螯合劑的濃度為300mM。64.根據權利要求54或55中任一項所述的組合物,其中所述組合物的pH為10.5至11.5。65.根據權利要求64所述的組合物,其中所述組合物的pH為11。66.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述組合物進一步包括至少一種能夠在pH范圍9.5至11.5內緩沖的緩沖劑。67.根據權利要求66所述的組合物,其中所述緩沖劑是β-丙氨酸。68.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述組合物進一步包括水溶性有機溶劑。69.根據權利要求68所述的組合物,其中所述水溶性有機溶劑是C1-C6烷醇。70.根據權利要求68所述的組合物,其中所述水溶性有機溶劑是乙醇。71.根據權利要求70所述的組合物,其中所述乙醇在組合物中以小于30體積%的濃度存在。72.根據權利要求71所述的組合物,其中所述乙醇在組合物中以小于24體積%的濃度存在。73.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述組合物進一步包括洗滌劑。74.根據權利要求73所述的組合物,其中所述洗滌劑是十二烷基硫酸鈉。75.根據權利要求54或55所述的組合物,其中所述組合物進一步包括消泡劑。76.根據權利要求75所述的組合物,其中所述消泡劑是Antifoam A濃縮物。77.根據權利要求60所述的組合物,其中所述核酸是人DNA。78.根據權利要求56所述的組合物,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述組合物用于穩定化所述生物學樣本的微生物組譜。79.根據權利要求54所述的組合物,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物包括:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。80.根據權利要求54所述的組合物,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物由下列組成:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。81.根據權利要求79所述的組合物,其中所述組合物的pH為11,并且包括:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。82.根據權利要求80所述的組合物,其中所述組合物的pH為11,并且由下列組成:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。83.根據權利要求79-82中任一項所述的組合物,其中所述組合物用于穩定化所述糞便樣本的微生物組譜。84.根據權利要求54所述的組合物,其中所述核酸是核糖核酸(RNA)。85.用于在環境溫度下穩定化生物學樣本中包含的核酸的試劑盒,所述試劑盒包括:a)樣本容器,其具有可重復密封的封閉物;b)水性組合物,其包括螯合劑,其中所述螯合劑以至少150mM的濃度存在,并且所述螯合劑是1,2-環己二胺四乙酸(CDTA),其中所述組合物具有大于9.5的pH,其中所述組合物任選地被包含在所述樣本容器內;c)均化裝置,其任選地被包含在所述樣本容器內;d)將所述生物學樣本或其部分轉移到所述樣本容器中的裝置;和d)使用說明書。86.根據權利要求85所述的試劑盒,其中所述核酸是脫氧核糖核酸(DNA)。87.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述生物學樣本選自糞便樣本、土壤樣本或水樣本。88.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述生物學樣本是污水樣本。89.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述生物學樣本是廢水樣本。90.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本。91.根據權利要求90所述的試劑盒,其中所述哺乳動物是人。92.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述螯合劑的濃度為150mM至500mM。93.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述螯合劑的濃度為250mM至350mM。94.根據權利要求92所述的試劑盒,其中所述螯合劑的濃度為300mM。95.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述組合物的pH為10.5至11.5。96.根據權利要求95所述的試劑盒,其中所述組合物的pH為11。97.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述組合物進一步包括至少一種能夠在pH范圍9.5至11.5內緩沖的緩沖劑。98.根據權利要求97所述的試劑盒,其中所述緩沖劑是β-丙氨酸。99.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述組合物進一步包括水溶性有機溶劑。100.根據權利要求99所述的試劑盒,其中所述水溶性有機溶劑是C1-C6烷醇。101.根據權利要求99所述的試劑盒,其中所述水溶性有機溶劑是乙醇。102.根據權利要求101所述的試劑盒,其中所述乙醇在組合物中以小于30體積%的濃度存在。103.根據權利要求102所述的試劑盒,其中所述乙醇在組合物中以小于24體積%的濃度存在。104.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述組合物進一步包括洗滌劑。105.根據權利要求104所述的試劑盒,其中所述洗滌劑是十二烷基硫酸鈉。106.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述組合物進一步包括消泡劑。107.根據權利要求106所述的試劑盒,其中所述消泡劑是Antifoam A濃縮物。108.根據權利要求91所述的試劑盒,其中所述核酸是人DNA。109.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述試劑盒用于穩定化所述生物學樣本的微生物組譜。110.根據權利要求85或86所述的試劑盒,其中所述均化裝置是至少一個混合球。111.根據權利要求110所述的試劑盒,其中所述至少一個混合球是不銹鋼混合球或碳化鎢混合球。112.根據權利要求111所述的試劑盒,其中所述至少一個混合球是直徑為5.6-11.1mm并且密度為至少7.6g/cm3的不銹鋼混合球。113.根據權利要求112所述的試劑盒,其中所述不銹鋼混合球的直徑為7.1–8.7mm,并且所述樣本容器是內徑為12.9mm的圓底管。114.根據權利要求85所述的試劑盒,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物包括:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。115.根據權利要求85所述的試劑盒,其中所述核酸是DNA,所述生物學樣本是獲自哺乳動物的糞便樣本,所述組合物的pH為10.5至11.5,并且所述組合物由下列組成:數量為250mM至350mM的CDTA;數量為30mM至70mM的β-丙氨酸;數量為按體積計21.5%至23.5%的乙醇;數量為0至1%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0至0.2%(v/v)的Antifoam A濃縮物。116.根據權利要求114所述的試劑盒,其中所述組合物的pH為11,并且包括:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。117.根據權利要求115所述的試劑盒,其中所述組合物的pH為11,并且由下列組成:數量為300mM的CDTA;數量為50mM的β-丙氨酸;數量為23.5體積%的乙醇;數量為0.5%(w/v)的十二烷基硫酸鈉;和數量為0.1%(v/v)的Antifoam A濃縮物。118.根據權利要求114-117中任一項所述的試劑盒,其中所述核酸是微生物DNA,并且所述試劑盒用于穩定化生物學樣本的微生物組譜。119.根據權利要求118所述的試劑盒,其中所述均化裝置是直徑為5.6-11.1mm并且密度為至少7.6g/cm3的至少一個不銹鋼混合球,并且所述樣本容器是內徑為12.9mm的圓底管。120.根據權利要求85所述的試劑盒,其中所述核酸是核糖核酸(RNA)。
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