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一種高通量檢測食源性致病菌的方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-09
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201210322582.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種高通量檢測食源性致病菌的方法 
  • 項目單位 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
  • 發(fā)明人 王慧,儲瑞藹,謝東,韓雪松,周賢,邱紅玲,李井泉,尹珺,王壽利,王奕然 
  • 行業(yè)類別 健康產(chǎn)品質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)化和計量
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 吳賢遠(yuǎn)
  • 發(fā)布時間 2022-01-09  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明提供了一種高通量檢測食源性致病菌的方法,所述方法包括:采用針對多種致病菌標(biāo)志性DNA序列的通用引物對對樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列;使得所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列與分別針對所述致病菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針接觸,獲得帶有不同可檢測標(biāo)記物的雜交產(chǎn)物;檢測可檢測標(biāo)記物的信號以確定樣品中致病菌的存在或數(shù)量。本發(fā)明還提供了用于檢測致病菌的試劑盒。本發(fā)明的方法和試劑盒可準(zhǔn)確快速、高通量地檢測致病菌,具有易操作、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),其應(yīng)用前景廣泛。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種獲得樣品中致病菌的標(biāo)志性DNA序列的方法,所述致病菌為選自下組中的至少兩種:大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、單增李斯特菌(L.monocytogenes)、小腸結(jié)腸耶爾森菌(Yersimaenterocolitica)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni),所述方法包括:(i)獲得針對SEQIDNO:22所示序列ACGCGAAGAACCTTACC的通用上游引物和針對SEQIDNO:23所示序列TGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG的通用下游引物;(ii)采用所述通用上游引物和通用下游引物對所述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA,其中,所述標(biāo)志性DNA序列位于所述致病菌的16SrDNA中,且包含所述一種或多種致病菌各自獨(dú)有的特異性序列,其中,所述方法用于非疾病診斷和/或治療目的。2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述通用上游引物為與SEQIDNO:22所示序列的15~17個連續(xù)核苷酸序列完全一致的序列;所述通用下游引物為與SEQIDNO:23的15~23個連續(xù)核苷酸序列完全互補(bǔ)的序列。3.一種檢測樣品中致病菌的方法,所述致病菌為選自下組中的至少兩種:大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、單增李斯特菌(L.monocytogenes)、小腸結(jié)腸耶爾森菌(Yersimaenterocolitica)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni),所述方法包括:(A)采用權(quán)利要求1或2所述的方法獲得樣品中所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列;(B)提供分別針對所述至少兩種致病菌的標(biāo)志性DNA序列的相應(yīng)特異性捕獲探針;(C)在雜交條件下,使所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列與所述特異性捕獲探針接觸,并且在所述接觸之前、之時或之后用不同的可檢測標(biāo)記物標(biāo)記所述特異性捕獲探針或所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列與所述特異性捕獲探針形成的復(fù)合物,獲得帶有不同可檢測標(biāo)記物的雜交產(chǎn)物;(D)檢測連接到所述雜交產(chǎn)物上的可檢測標(biāo)記物的信號,以確定樣品中各種待測致病菌的存在或數(shù)量,其中,所述方法用于非疾病診斷和/或治療目的。4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法用于食品檢驗(yàn)、食品加工過程檢測或化妝品檢測。5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法用于食品檢疫。6.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述特異性捕獲探針選自:a)針對SEQIDNO:16所示大腸桿菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針;b)針對SEQIDNO:17所示鼠傷寒沙門氏菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針;c)針對SEQIDNO:18所示蠟狀芽孢桿菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針;d)針對SEQIDNO:19所示單增李斯特菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針;e)針對SEQIDNO:20所示小腸結(jié)腸耶爾森菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針;和f)針對SEQIDNO:21所示空腸彎曲桿菌標(biāo)志性DNA序列的特異性捕獲探針。7.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(C)中的所述可檢測標(biāo)記物為編碼微球,所述編碼微球采用可產(chǎn)生不同可檢測信號的標(biāo)記物編碼。8.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(D)中的所述檢測采用選自下組的一種或多種系統(tǒng)或儀器:液相芯片檢測系統(tǒng)、流式細(xì)胞儀或固相芯片。9.一種用于檢測致病菌的試劑盒,所述致病菌為選自下組中的至少兩種:大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、單增李斯特菌(L.monocytogenes)、小腸結(jié)腸耶爾森菌(Yersimaenterocolitica)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni),所述試劑盒包含:(i')針對SEQIDNO:22所示序列ACGCGAAGAACCTTACC的通用上游引物和針對SEQIDNO:23所示序列TGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG的通用下游引物,其中采用所述通用上游引物和通用下游引物對所述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,可獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA,其中,所述標(biāo)志性DNA序列位于所述致病菌的16SrDNA中,且包含所述一種或多種致病菌各自獨(dú)有的特異性序列;(ii')針對所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列的相應(yīng)特異性捕獲探針、各種可檢測標(biāo)記物、或各種特異性捕獲探針與可檢測標(biāo)記物的連接物;(iii')一個或多個容器和/或包裝物;(iv')任選的,PCR擴(kuò)增用試劑;(v')任選的,用于連接所述特異性捕獲探針和可檢測標(biāo)記物的試劑;(vi')任選的,檢測信號用的試劑;(vii')任選的,使用說明書。10.一種用于檢測致病菌并治療致病菌感染的試劑盒,所述致病菌為選自下組中的至少兩種:大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、單增李斯特菌(L.monocytogenes)、小腸結(jié)腸耶爾森菌(Yersimaenterocolitica)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni),所述試劑盒包含:(i')針對SEQIDNO:22所示序列ACGCGAAGAACCTTACC的通用上游引物和針對SEQIDNO:23所示序列TGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG的通用下游引物,其中采用所述通用上游引物和通用下游引物對所述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,可獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA,其中,所述標(biāo)志性DNA序列位于所述致病菌的16SrDNA中,且包含所述一種或多種致病菌各自獨(dú)有的特異性序列;(ii')針對所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列的相應(yīng)特異性捕獲探針、各種可檢測標(biāo)記物、或各種特異性捕獲探針與可檢測標(biāo)記物的連接物;(iii')一個或多個容器和/或包裝物;(iv')任選的,PCR擴(kuò)增用試劑;(v')任選的,用于連接所述特異性捕獲探針和可檢測標(biāo)記物的試劑;(vi')任選的,檢測信號用的試劑;(vii')任選的,使用說明書;以及(viii')致病菌治療劑。11.下述物質(zhì)在制備檢測致病菌的試劑盒中的用途:(i)針對SEQIDNO:22所示序列ACGCGAAGAACCTTACC的通用上游引物和針對SEQIDNO:23所示序列TGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG的通用下游引物,其中采用所述通用上游引物和通用下游引物對所述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,可獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA,其中,所述標(biāo)志性DNA序列位于所述致病菌的16SrDNA中,且包含所述一種或多種致病菌各自獨(dú)有的特異性序列;(ii)針對所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列的相應(yīng)特異性捕獲探針、各種可檢測標(biāo)記物、或各種特異性捕獲探針與可檢測標(biāo)記物的連接物;(iii)一個或多個容器和/或包裝物;(iv)任選的,PCR擴(kuò)增用試劑;(v)任選的,用于連接所述特異性捕獲探針和可檢測標(biāo)記物的試劑;(vi)任選的,檢測信號用的試劑;(vii)任選的,使用說明書。12.下述物質(zhì)在制備檢測致病菌并治療致病菌感染的試劑盒中的用途:(i)針對SEQIDNO:22所示序列ACGCGAAGAACCTTACC的通用上游引物和針對SEQIDNO:23所示序列TGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG的通用下游引物,其中采用所述通用上游引物和通用下游引物對所述樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,可獲得所述致病菌的標(biāo)志性DNA,其中,所述標(biāo)志性DNA序列位于所述致病菌的16SrDNA中,且包含所述一種或多種致病菌各自獨(dú)有的特異性序列;(ii)針對所述致病菌的標(biāo)志性DNA序列的相應(yīng)特異性捕獲探針、各種可檢測標(biāo)記物、或各種特異性捕獲探針與可檢測標(biāo)記物的連接物;(iii)一個或多個容器和/或包裝物;(iv)任選的,PCR擴(kuò)增用試劑;(v)任選的,用于連接所述特異性捕獲探針和可檢測標(biāo)記物的試劑;(vi)任選的,檢測信號用的試劑;(vii)任選的,使用說明書;以及(viii)致病菌治療劑。
    展開

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