本發(fā)明提供了至少一種分離細(xì)胞以及制備它們的方法，所述分離細(xì)胞包含至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體和/或其片段。具體而言，本發(fā)明提供了編碼至少一種用于治療乙型肝炎病毒(HBV)和肝細(xì)胞性肝癌(HCC)的HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體的多核苷酸、構(gòu)建體和載體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了檢測(cè)HBV和HCC的試劑盒和方法。

1.一種分離細(xì)胞，其包含至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體，
其中，所述HBV表位為HLA-A2限制性的，
其中，所述HBV表位包含至少一種乙型肝炎核心抗原；以及其中，所
述HBV表位是由SEQ?ID?NO:26組成的HBc18-27表位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞，其進(jìn)一步包含至少一種第二HBV表位
反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體，其中，所述第二HBV表位與第一HBV表位不同。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞，其中，所述外源T細(xì)胞受體包含
至少一條α鏈和至少一條β鏈，
該α鏈包含序列：SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:10和SEQ?ID?NO:11，
該β鏈包含序列：SEQ?ID?NO:21、SEQ?ID?NO:22和SEQ?ID?NO:23。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞，其中，所述外源T細(xì)胞受體包含：
至少一條SEQ?ID?NO:12的α鏈和至少一條SEQ?ID?NO:24的β鏈。
5.根據(jù)權(quán)利要求中3所述的細(xì)胞，其中，所述外源T細(xì)胞受體包含：
至少一條SEQ?ID?NO:12的α鏈和至少一條SEQ?ID?NO:24的β鏈。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種造血干
細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種造血干細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種造血干細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種造血干細(xì)胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周
血淋巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求4所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
14.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
15.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
16.根據(jù)權(quán)利要求8所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
17.根據(jù)權(quán)利要求9所述的細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞為至少一種外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)源T細(xì)胞。
18.一種分離多核苷酸，其包含至少一種編碼至少一條α鏈的序列和至
少一種編碼至少一條β鏈的序列，其中，所述編碼α鏈的序列包含選自SEQ?
ID?NO:1和SEQ?ID?NO:5中的至少一種序列、選自SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?
NO:6中的至少一種序列以及選自SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:7中的至少一
種序列，和所述編碼β鏈的序列包含選自SEQ?ID?NO:13和SEQ?ID?NO:17中
的至少一種序列、選自SEQ?ID?NO:14和SEQ?ID?NO:18中的至少一種序列以
及選自SEQ?ID?NO:15和SEQ?ID?NO:19中的至少一種序列；其中，所述α鏈
和β鏈為至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體，其中，所述HBV表位
為HLA-A2限制性的，其中，所述HBV表位包含至少一種乙型肝炎核心抗
原；以及其中，所述HBV表位是由SEQ?ID?NO:26組成的HBc18-27表位。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的分離多核苷酸，其中，所述編碼α鏈的序
列包含SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:7，和所述編碼β鏈的序
列包含SEQ?ID?NO:17、SEQ?ID?NO:18和SEQ?ID?NO:19。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的分離多核苷酸，其中，所述編碼α鏈的序
列選自SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:8中，和所述編碼β鏈的序列選自SEQ?ID?
NO:16和SEQ?ID?NO:20中。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的分離多核苷酸，其中，所述編碼α鏈的序
列選自SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:8中，和所述編碼β鏈的序列選自SEQ?ID?
NO:16和SEQ?ID?NO:20中。
22.一種分離多肽，其由根據(jù)權(quán)利要求18～21中任一項(xiàng)所述的至少一種
多核苷酸編碼。
23.一種分離多肽，其包含：
包含SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:10和SEQ?ID?NO:11的α鏈和包含SEQ?
ID?NO:21、SEQ?ID?NO:22和SEQ?ID?NO:23的β鏈；
其中，所述多肽為至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體并且所述
HBV表位為HLA-A2限制性的。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的分離多肽，其中：
所述α鏈由SEQ?ID?NO:12組成，并且所述β鏈由SEQ?ID?NO:24組成。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的多肽，其中，所述HBV表位為HBc18-27。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的多肽，其中，所述HBV表位為HBc18-27。
27.根據(jù)權(quán)利要求22所述的多肽，其中，所述多肽為至少一種可溶性
TCR。
28.根據(jù)權(quán)利要求23～26所述的多肽，其中，所述多肽為至少一種可溶
性TCR。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的多肽，其中，所述可溶性TCR與至少一種
抗病毒藥連接。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的多肽，其中，所述可溶性TCR與至少一種
抗病毒藥連接。
31.一種構(gòu)建體，其包含與至少一種啟動(dòng)子可操作地連接的根據(jù)權(quán)利要
求18～21中任一項(xiàng)所述的多核苷酸。
32.一種逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，其包含權(quán)利要求31所述的構(gòu)建體或者根據(jù)權(quán)
利要求18～21中任一項(xiàng)所述的多核苷酸。
33.一種T細(xì)胞，其包含權(quán)利要求32所述的載體。
34.一種制備至少一種T細(xì)胞的方法，所述T細(xì)胞包含用于遞送到至少
一種受試對(duì)象的至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體，該方法包括用
根據(jù)權(quán)利要求31所述的構(gòu)建體或根據(jù)權(quán)利要求32所述的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)至少一種
從所述受試對(duì)象中分離的T細(xì)胞。
35.一種制備至少一種HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體的方法，該方
法包括：
(a)從至少一種消退了HBV感染癥狀的HBV感染個(gè)體中分離外周血淋
巴細(xì)胞(PBL)，且基于反應(yīng)性細(xì)胞與標(biāo)記的HLA-A2-HBc18-27表位結(jié)合的能
力，從非反應(yīng)性細(xì)胞中分離至少一種HBc18-27表位反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞，其
中所述表位由氨基酸SEQ?ID?NO:26組成；
(b)識(shí)別所述的至少一種HBc18-27表位反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的至少一種
克隆；
(c)由步驟(b)的HBV表位反應(yīng)性T細(xì)胞克隆編碼至少一種T細(xì)胞受體
的至少一條α鏈的至少一種多核苷酸和編碼至少一種T細(xì)胞受體的至少一條
β鏈的至少一種多核苷酸；
(d)將步驟(c)的多核苷酸遞送至至少一種細(xì)胞；和
(e)在適合所述細(xì)胞表達(dá)所述HBV表位反應(yīng)性外源T細(xì)胞受體的條件下
孵育在(d)中產(chǎn)生的細(xì)胞。
36.至少一種根據(jù)權(quán)利要求1～17和33中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞、至少一種
根據(jù)權(quán)利要求32所述的載體和/或至少一種根據(jù)權(quán)利要求22～30中任一項(xiàng)所
述的多肽在制備用于治療HBV感染和/或HBV相關(guān)的肝細(xì)胞性肝癌的藥物中
的用途。
37.一種檢測(cè)和/或治療HBV感染和/或HBV相關(guān)的肝細(xì)胞性肝癌的試
劑盒，該試劑盒包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1～17和33中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞、
至少一種根據(jù)權(quán)利要求32所述的載體和/或至少一種根據(jù)權(quán)利要求22～30中
任一項(xiàng)所述的多肽。