本發明提供可以選擇性地同源重組目標基因的方法、以及利用該方法得到的重組DNA分子。同源重組方法，該方法使用PCR產物和線性化載體，所述PCR產物包含兩末端具有擴增用引物序列P1和P2的靶基因序列；所述線性化載體具有包含與該PCR產物的擴增用引物序列P1和P2同源的核苷酸序列的同源重組區VP1和VP2，在VP1的末端側具有包含與P1內側的部分序列T1同源的核苷酸序列的同源重組區VT1、和/或在VP2的末端側具有包含與P2內側的部分序列T2同源的核苷酸序列的同源重組區VT2(T1和T2的至少一方具有靶基因所特有的核苷酸序列)，該方法包括：使上述PCR產物參與同源重組反應，以將其插入上述載體中，由此得到在載體中特異性地插入有目標PCR產物的重組DNA分子。克隆方法，該方法利用上述同源重組方法，制備在載體中特異性地插入有目標PCR產物的重組DNA分子，之后擴增所得的重組DNA分子。

1.同源重組方法，該方法使用PCR產物和線性化載體，所述PCR
產物包含兩末端具有擴增用引物序列P1和P2的靶基因序列；所述線
性化載體具有包含與該PCR產物的擴增用引物序列P1和P2同源的
核苷酸序列的同源重組區VP1和VP2，并且，在VP1的末端側具有
包含與P1內側的部分序列T1同源的核苷酸序列的同源重組區VT1、
和/或在VP2的末端側具有包含與P2內側的部分序列T2同源的核苷
酸序列的同源重組區VT2，其中T1和T2的至少一方具有靶基因所特
有的核苷酸序列，
該方法包括：使上述PCR產物參與同源重組反應，以將其插入上
述載體中，由此得到在載體中特異性地插入有目標PCR產物的重組
DNA分子。
2.權利要求1所述的方法，其中T1和T2的兩方具有靶基因所
特有的核苷酸序列。
3.權利要求1所述的方法，其中擴增用引物序列P1和P2的一
方或兩方具有靶基因所特有的核苷酸序列。
4.權利要求1所述的方法，其中PCR產物是通過2次PCR而制
備的產物，在第1次PCR中，使用包含T1序列的擴增用引物和包含
P3序列的擴增用引物來實施，其中P3序列與上述載體所具有的同源
重組區VT1、VP1、VT2和VP2不具有同源性；在第2次PCR中，
使用包含P1序列的擴增用引物和包含P2序列的擴增用引物來實施。
5.權利要求4所述的方法，其中包含P1序列的擴增用引物的3’
端側區和包含T1序列的擴增用引物的5’端側區具有部分重復的序列，
而包含P2序列的擴增用引物和包含P3序列的擴增用引物具有或不具
有部分重復的序列。
6.權利要求1所述的方法，其中擴增用引物序列P1和P2分別
為10個核苷酸以上。
7.權利要求1所述的方法，其中載體的同源重組區VP1+VT1和
VP2+VT2分別為11個核苷酸以上。
8.權利要求1所述的方法，其中擴增用引物序列P1和P2的一
方或兩方來自核酸酶耐性寡引物。
9.權利要求1所述的方法，其中上述靶基因為抗體基因或T細
胞受體基因，該靶基因包含來自上述抗體基因或T細胞受體基因的恒
定區的序列和來自可變區的序列，上述載體的同源重組區VP1+VT1
和VP2+VT2的一方為來自抗體基因或T細胞受體基因的恒定區的序
列。
10.權利要求9所述的方法，其中上述載體的同源重組區
VP1+VT1和VP2+VT2的另一方不具有來自抗體基因和T細胞受體基
因的核苷酸序列。
11.權利要求1～10中任一項所述的方法，其中上述同源重組反
應是使用Red即Redα/β或RecE/T體系在細胞內進行。
12.權利要求1～10中任一項所述的方法，其中上述同源重組反
應通過In-Fusion法來進行。
13.靶基因的克隆方法，該方法包括：利用權利要求1～12中任
一項所述的同源重組方法，制備在載體中特異性地插入有目標PCR產
物的重組DNA分子，之后擴增具有所得重組DNA分子的重組體。
14.試劑盒，其中含有線性化載體，該線性化載體用于同源重組
方法，所述同源重組方法包括：得到在載體中特異性地插入有PCR產
物的重組DNA分子，所述PCR產物含有在兩末端具有擴增用引物序
列P1和P2的靶基因序列，
上述線性化載體具有包含與PCR產物的擴增用引物序列P1和P2
同源的核苷酸序列的同源區VP1和VP2，并且，在VP1的末端側具
有包含與P1內側的部分序列T1同源的核苷酸序列的同源重組區
VT1、和/或在VP2的末端側具有包含與P2內側的部分序列T2同源
的核苷酸序列的同源重組區VT2。