本發(fā)明公開了一種適用于規(guī)模化生產(chǎn)重組人源膠原蛋白的畢赤酵母發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基中添加了0.01～10g/L代謝調(diào)節(jié)劑，能夠調(diào)節(jié)畢赤酵母的新陳代謝，加快重組蛋白的表達(dá)，縮短發(fā)酵周期，降低能耗，減少出錯(cuò)風(fēng)險(xiǎn)，保證穩(wěn)定的工業(yè)化生產(chǎn)。使用本發(fā)明的培養(yǎng)基，在1000L發(fā)酵罐上規(guī)模化生產(chǎn)重組人源膠原蛋白，甲醇誘導(dǎo)周期縮短了20％，重組人源膠原蛋白的表達(dá)量提高了16.5％。本發(fā)明的畢赤酵母發(fā)酵培養(yǎng)基特別適用于工業(yè)化高密度發(fā)酵表達(dá)重組人源膠原蛋白的畢赤酵母甲醇誘導(dǎo)階段，能夠有效降低生產(chǎn)成本，產(chǎn)生顯著的經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)于重組人源膠原蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)具有十分重要的實(shí)際意義。

1.一種適用于規(guī)模化生產(chǎn)重組人源膠原蛋白的畢赤酵母發(fā)酵方法，其包括：將菌種液按10％接種量加到含有500L發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn) 速200-600rpm、罐壓0.2-1.0bar、調(diào)節(jié)空氣流量使溶氧＞30％；當(dāng)碳源耗盡后， 溶氧陡然上升，開始流加50％甘油，補(bǔ)充碳源，至菌體濕重為216g/L，停止補(bǔ)加50％ 甘油；甘油耗盡后開始流加甲醇，作為新的碳源，進(jìn)入甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)階段，通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn) 速、罐壓、空氣流量和流加甲醇速度使溶氧＞20％，每8小時(shí)進(jìn)行取樣，測(cè)定菌 體濕重和重組人源膠原蛋白表達(dá)量，誘導(dǎo)發(fā)酵96h后，結(jié)束發(fā)酵，收集發(fā)酵液，離心獲 得發(fā)酵液上清，經(jīng)HPLC檢測(cè)，最終重組人源膠原蛋白濃度為18.4g/L，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基：85％H₃PO₄ 26.7mL/L；CaSO₄·2H₂O 1.175g/L；K₂SO₄ 18.2g/L；MgSO₄·7H₂O 14.9g/L；KOH 4.13g/L；甘油40.0g/L；PTM1 4.35mL/L；丙酮酸鈉 0.5g/L；所述畢赤酵母為巴斯德畢赤酵母Pichia pastoris，保藏編號(hào)為CGMCC No.5021。