本發(fā)明涉及蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留的檢測方法，尤其涉及一種液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定蜂王漿中雙甲脒、單甲脒2,4?二甲基苯基甲酰胺和2,4?二甲基苯胺的方法。一種液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量的方法，該方法試樣加氨化水稀釋后用氨化乙腈沉淀蛋白并提取，通過中性氧化鋁固相萃取柱對提取液進(jìn)行凈化，采用液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測，雙甲脒和2,4?二甲基苯胺內(nèi)標(biāo)法定量，單甲脒和2,4?二甲基苯基甲酰胺外標(biāo)法定量。該方法的靈敏度能滿足蜂王漿中雙甲脒及其代謝物殘留量的檢測和確證要求。

1.液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量的方法，所述的代謝產(chǎn)物為單甲脒2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺，其特征在于該方法包括以下的步驟：一、提取：稱取蜂王漿試樣2.0g于兩個50mL聚塞離心管中，加入同位素內(nèi)標(biāo)，加8mL5％氨水溶液，2000轉(zhuǎn)/分鐘，渦旋混勻5分鐘，靜置5分鐘，加10mL5％氨水乙腈溶液，2000轉(zhuǎn)/分鐘，渦旋混勻，靜置5分鐘，定容至20mL，渦旋混勻5分鐘，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心，移取上清液2.0mL，加2mL5％氨水乙腈溶液混勻，渦旋混勻，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心，取上清液待凈化；二、活化氧化鋁固相萃取柱采用3mL乙腈和3mL5％氨水乙腈溶液依次活化；三、凈化將提取溶液轉(zhuǎn)移至氧化鋁固相萃取柱，接收流出液，加2mL5％氨水乙腈溶液洗滌氧化鋁固相萃取柱，接收全部流出液，40℃下氮?dú)獯抵?.5mL以下，加乙腈至2mL，再加2mL水，渦旋混勻，過0.22μm濾膜，待LC-MS/MS測定；四、測定4.1)液相色譜參數(shù)：Agilent Eclipse XDB-C₁₈色譜柱，150mm×4.6mm(i.d)，5μm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃；流動相：0.15％甲酸溶液和乙腈梯度洗脫；液相色譜梯度洗脫程序如下： 時間(min) 流速(mL/min) 0.15％甲酸水溶液(％) 乙腈(％) 0.00 0.4 60.0 40.0 8.00 0.4 35.0 65.0 9.00 0.7 5.0 95.0 14.00 0.7 5.0 95.0 15.00 0.7 60.0 40.0 16.00 0.4 60.0 40.0 19.00 0.4 60.0 40.0 4.2)質(zhì)譜參數(shù)離子源參數(shù)：電離方式：電噴霧電離；掃描模式：正離子；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測；離子源溫度：130℃；氣體流速：16L/min；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：11L/min；毛細(xì)管電壓：2500V；雙甲瞇、單甲脒、2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺的質(zhì)譜參數(shù)如下： *表示為定量離子對；4.3)空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按步驟4.1)和4.2)測定方法進(jìn)行；4.4)結(jié)果計(jì)算和表述按公式(1)計(jì)算試樣中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量： 式中：X—試樣中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物量的含量，單位為毫克每千克；C—由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到樣液中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物的濃度，單位為微克每毫升；V—樣液最終體積，單位為毫升；m—最終樣液所代表的試樣量，單位為克。