本發明公開了一種可對依諾肝素鈉中五糖結構單元進行定性和定量分析的方法，其包括如下步驟：a)利用抗凝血酶III的親和色譜柱對依諾肝素鈉樣品進行分離并制備成多個不同親和活性的組分；b)用混合肝素酶對依諾肝素鈉樣品及多個不同親和活性的組分分別進行完全酶解；c)對每一個完全酶解產物分別進行毛細管電泳分離分析；d)根據公式：計算所分離的各個成分的電泳淌度；e)結合寡糖的電荷質量比與電泳淌度之間的如下線性關系：對每一個完全酶解產物的毛細管電泳圖中的分離峰所對應的酶解產物進行鑒定，以定性確定出五糖結構單元酶解片段的分離峰；f)根據所確定的五糖結構單元酶解片段的分離峰的峰面積，定量計算出五糖結構單元的含量。

1.一種可對依諾肝素鈉中五糖結構單元進行定性和定量分析的方法，其特征在于，包括如下步驟：a)利用抗凝血酶III的親和色譜柱對依諾肝素鈉樣品按親和活性進行分離并制備成多個不同親和活性的組分；所述的抗凝血酶III的親和色譜柱的制備包括如下步驟：①使過量的依諾肝素鈉樣品與抗凝血酶III進行孵育，以激活抗凝血酶III并占據其活性位點；②使活性位點被保護的抗凝血酶III以共價鍵固定到色譜柱內的水化填料上；其中，依諾肝素鈉與抗凝血酶III的質量比為2.5:1～5:1；進行孵育的緩沖溶液的pH為8.0～8.5、是由150～250mmol/L的碳酸氫鈉溶液與450～550mmol/L的氯化鈉溶液形成；1毫升水化填料中含抗凝血酶III的質量≤5毫克；b)用混合肝素酶對依諾肝素鈉樣品及步驟a)所制備的多個不同親和活性的組分分別進行完全酶解；c)對步驟b)所得到的每一個完全酶解產物分別進行毛細管電泳分離分析；d)根據公式：計算步驟c)所分離的各個成分的電泳淌度，其中：L_T和L_D分別是毛細管的總長和有效長度，V為分離電壓，t為遷移時間；e)結合寡糖的電荷質量比與電泳淌度之間的如下線性關系：對每一個完全酶解產物的毛細管電泳圖中的分離峰所對應的酶解產物進行鑒定，以定性確定出五糖結構單元酶解片段的分離峰；其中：Z/M為寡糖電荷質量比，μ為對應的電泳淌度；f)根據所確定的五糖結構單元酶解片段的分離峰的峰面積，采用面積百分數歸一化方法，定量計算出五糖結構單元的含量。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的水化填料是由NHS或CNBr官能團化的瓊脂糖。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)利用抗凝血酶III的親和色譜柱制備不同親和活性組分的步驟包括：Ⅰ)洗脫抗凝血酶III所結合的依諾肝素鈉；Ⅱ)平衡色譜柱；Ⅲ)上樣；Ⅳ)進行梯度洗脫和色譜分離。4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述抗凝血酶III為野生型或重組型。5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟Ⅰ)采用含有1.5～4.0mol/L氯化鈉的Tris-HCl緩沖溶液進行洗脫。6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟Ⅱ)采用含有5～30mmol/L氯化鈉的Tris-HCl緩沖溶液進行平衡10～20分鐘。7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟Ⅲ)先采用含有5～30mmol/L氯化鈉的Tris-HCl緩沖溶液溶解樣品，配制成濃度為10～140mg/mL的樣品溶液，然后以進樣量為1～30μL進行上樣。8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟Ⅳ)進行梯度洗脫的條件為：0～15分鐘：A相為100％，B相為0；15～20分鐘：A相為65％～75％，B相為25％～35％；20～35分鐘：A相為0％，B相為100％；所述的A相為含有5～30mmol/L氯化鈉的Tris-HCl緩沖溶液，所述的B相為含有1.5～4.0mol/L氯化鈉的Tris-HCl緩沖溶液。9.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟Ⅳ)進行色譜分離的條件為：流動相為pH7.0～8.0、濃度為5～20mmol/L的Tris-HCl緩沖溶液；分離時，流動相和色譜柱均保持1～15℃；檢測波長為紫外230～235nm。10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟b)中所述的混合肝素酶包括肝素酶I，肝素酶II和肝素酶III中的至少兩種。11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于：所述混合肝素酶是包含肝素酶I、肝素酶II和肝素酶III的混合溶液。12.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)進行毛細管電泳分離的分析條件為：石英毛細管總長為50～100cm，柱內徑為25～75μm；緩沖溶液含有150～300mmol/LTris-H₃PO₄和1～5mmol/L的MgCl₂，pH為1.5～4.0，使用前需加入0.1～5.0％質量濃度、分子量范圍為5000～100000的聚乙二醇；毛細管電泳時使用電壓為-15～-30kV；采用壓力進樣，進樣壓力為1～5psi，進樣時間為5～30s；在最后一個單硫酸化二糖出峰之后施加1～10psi的壓力；電泳時毛細管柱溫為10～40℃，檢測波長為紫外230-235nm。