本發明提供了一種電致化學發光成像方法快速分析單細胞內成分的方法利用，魯米諾電致化學發光被首次應用于單細胞內生物分子(如葡萄糖)的檢測。在檢測過程中，單個細胞被直接定位在單個細胞大小的微洞電極；加入含有魯米諾、曲通100和葡萄糖氧化酶的混合溶液后，曲通100可以破壞細胞膜，釋放細胞內的葡萄糖到微洞中，和洞內的葡萄糖氧化酶反應生成過氧化氫；過氧化氫與魯米諾反應在正電位下產生光信號。這種新發明的電化學發光測定方法將有可能被應用于對單細胞中更多的細胞內分子進行快速分析，以闡明細胞間的異質性。

1.一種電致化學發光成像方法快速分析單細胞內成分的方法，待檢測的成分在對應的
氧化酶的作用下催化產生雙氧水，其特征在于，包括如下步驟：
（1）提供表面具有若干微孔的氧化銦錫電極表面作為微電極，將該微電極作為工作電
極與電化學工作站連接，銀/氯化銀和鉑電極分別作為參比電極和輔助電極，通過電沉積將
金納米顆粒沉積到微電極的微孔表面；其中，所謂微電極表面設置有64-256個用于容納單
個細胞的微孔；
（2）以含有200-500 μM L012的10-20 mM PBS的混合溶液作為氧化銦錫片發光成像的
溶液加入到微孔中，將待分析的單個細胞設置于微孔內，加入表面活性劑和待分析成分對
應的氧化酶，使用電壓發生器施加正負交替的電壓在電極上誘使發光，然后使用電化學發
光成像裝置連續采集曝光時間為60s的兩張照片，來收集來自細胞的發光信號；
（3）使用Image J軟件計算兩個圖像中發光強度的差異，同時為了校準來自ITO微孔處
的發光差異，將50-100 μM過氧化氫水溶液引入微孔內并對微孔發光的光強進行采集，在微
電極的微孔內的單個細胞的發光強度和加入的過氧化氫收集到的發光強度的比率作為信
號被用于細胞內成分的分析檢測。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述的待檢測成分為葡萄糖、乳酸或膽固醇中的
任意一種。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，金納米顆粒的電沉積通過在含
有 1-5 mM HAuCl₄的0.1 M HCl溶液中，循環掃描得到，其中，電勢由?0.2 V到0.55 V，循環
掃描400-800s。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述電壓發生器施加的正負交
替的電壓為1 V，2 s 和-1 V， 0.5 s。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述的表面活性劑為0.1-0.5
%的Triton X-100，所述的氧化酶為濃度為0.1 -0.5 U/mL的葡萄糖氧化酶。