本發(fā)明涉及一種屬于藥物領(lǐng)域，尤其涉及一種同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的檢測(cè)方法。超高液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，該方法包括以下的步驟：1）對(duì)照品的配制；2）內(nèi)標(biāo)溶液的配制；3）樣品溶液制備；4）流動(dòng)相溶液的配制；5）色譜條件的設(shè)置；6）質(zhì)譜條件的優(yōu)化；7）樣品測(cè)定；8）梯度濃度對(duì)照品溶液的配制；9）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備；10）數(shù)據(jù)分析計(jì)算。本發(fā)明具有以下的特點(diǎn)：1、方法先進(jìn)性；2、方法快捷高效，低損耗；3、臨床應(yīng)用前景及作用良好。

1.超高液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于該方法包括以下的步驟：1）對(duì)照品的配制精密稱取萬古霉素、妥布霉素對(duì)照品，分別置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，備用；2）內(nèi)標(biāo)溶液的配制精密稱取阿替洛爾對(duì)照品，置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質(zhì)量濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，備用；3）樣品溶液制備精密量取骨髓炎患者術(shù)后組織引流液，置于具塞離心試管中，定量加入步驟2）的阿替洛爾內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混勻，精密加入乙腈沉淀蛋白，充分渦旋，高速離心后，分離上清液；上清液中加入適量二氯甲烷，充分渦旋，進(jìn)行液液萃取，高速離心，定量吸取上清液，加等量純水稀釋，即得樣品溶液，備用；4）流動(dòng)相溶液的配制精密量取色譜純乙腈，定量加入色譜純甲酸，配制成體積濃度為0.1%的甲酸乙腈溶液，作為流動(dòng)相A相，備用；精密量取純水，定量加入色譜純甲酸，配制成體積濃度為0.1%的甲酸水溶液，作為流動(dòng)相B相，備用；5）色譜條件的設(shè)置選擇以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為2.1×100mm?，填料內(nèi)徑為1.7μm的色譜柱；柱溫為45℃，流動(dòng)相流速為0.3ml/min；取步驟1）的對(duì)照品溶液與步驟2）的內(nèi)標(biāo)溶液，定量進(jìn)樣，進(jìn)行梯度洗脫；流動(dòng)相梯度洗脫程序如下：0-1.00min，5%A相和95%B相；1.00min-4.00min，40%A相和60%B相；4.00min-4.50min，99%A相和1%B相；4.50min-6.50min，99%A相和1%B相；6.50min-7.00min，5%A相和95%B相；7.00min-10.00min，5%A相和95%B相，進(jìn)行梯度洗脫；采用二極管整列檢測(cè)器進(jìn)行色譜峰檢測(cè)；6）質(zhì)譜條件的優(yōu)化選擇三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，正離子模式下，采用MRM掃描模式，萬古霉素m/z：725-144；妥布霉素m/z：468-324；阿替洛爾m/z：267-74；取步驟1）對(duì)照品溶液、步驟2）的內(nèi)標(biāo)溶液，定量進(jìn)樣，進(jìn)行質(zhì)譜分析，并由此得到對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖；7）樣品測(cè)定取步驟3）的樣品溶液，分別定量進(jìn)樣，在步驟5）與步驟6）的條件下，測(cè)定，分別得到萬古霉素、妥布霉素對(duì)照品、阿替洛爾內(nèi)標(biāo)物以及樣品的總離子流圖，樣品圖譜中，與萬古霉素、妥布霉素對(duì)照品以及阿替洛爾內(nèi)標(biāo)物相同保留時(shí)間處，為引流液樣品中的待測(cè)萬古霉素與妥布霉素，以及定量加入的阿替洛爾內(nèi)標(biāo)物；8）梯度濃度對(duì)照品溶液的配制精密吸取步驟1）的對(duì)照品溶液，置于容量瓶中，加純水，稀釋成梯度濃度的萬古霉素對(duì)照品溶液以及妥布霉素對(duì)照品溶液，備用；9）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取骨髓炎患者空白組織液多份，分別定量加入步驟8）的梯度濃度對(duì)照品溶液，按照步驟3）方法操作，得到梯度加標(biāo)樣品溶液，在步驟7）的條件下進(jìn)行測(cè)定；以萬古霉素峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值對(duì)萬古霉素濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程，為萬古霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=35.522x+0.1351，r=0.9981；以妥布霉素峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值對(duì)妥布霉素濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程，為妥布霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=16.593x-0.0327，r=0.9959；其中y為被測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，x為被測(cè)物質(zhì)量濃度；?10）數(shù)據(jù)分析計(jì)算記錄萬古霉素，妥布霉素和阿替洛爾的峰面積，計(jì)算萬古霉素與內(nèi)標(biāo)阿替洛爾峰面積的比值和妥布霉素與內(nèi)標(biāo)阿替洛爾峰面積的比值，分別代入各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出萬古霉素和妥布霉素的質(zhì)量濃度；即為組織引流液中兩種藥物的局部濃度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟6）的質(zhì)譜參數(shù)條件如下：毛細(xì)管電壓3KV，提取電壓30V，錐孔電壓3V，源溫度150℃，去溶劑溫度400℃，去溶劑氣750L/hr，錐孔氣50L/hr，碰撞氣流速0.15mL/min；妥布霉素二級(jí)質(zhì)譜碰撞能20V，MRM掃描時(shí)間0.4～1min；阿替洛爾二級(jí)質(zhì)譜碰撞能22V，MRM掃描時(shí)間2.5～3.5min；萬古霉素二級(jí)質(zhì)譜碰撞能15V，MRM掃描時(shí)間3.3～4min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟8）定量稀釋成濃度梯度為10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.1mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.025mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超高液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，其特征在于步驟9）中取0.4mL骨髓炎患者空白組織液6份，編號(hào)1～6號(hào)，1號(hào)加入0.1mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和0.025mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL；2號(hào)加入0.5mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和0.05mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL；3號(hào)加入1mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和0.01mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL；4號(hào)加入2.5mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和0.25mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL；5號(hào)加入5mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和0.5mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL；6號(hào)加入10mg/mL的萬古霉素對(duì)照品溶液和1mg/mL的妥布霉素對(duì)照品溶液各50μL。