本發(fā)明屬于生物技術檢測領域，具體涉及一種霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒及其制備與應用。本發(fā)明所述試劑盒中含有包括霍亂弧菌溶血素基因檢測引物及探針、霍亂弧菌O1群抗原基因檢測引物及探針、霍亂弧菌O139群抗原基因檢測引物及探針、霍亂弧菌腸毒素基因檢測引物及探針，所述試劑盒檢測靈敏度高，最低檢出限為1×10copy/ml，準確率及陽性率均高達100%。

1.一種霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，所述試劑盒中包括霍亂弧菌溶血素基因檢
測引物及探針、霍亂弧菌O1群抗原基因檢測引物及探針、霍亂弧菌O139群抗原基因檢測引
物及探針、霍亂弧菌腸毒素基因檢測引物及探針，所述霍亂弧菌溶血素基因檢測引物由核
苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物組
成，霍亂弧菌溶血素基因檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述霍亂弧菌O1群抗
原基因檢測引物由核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID
NO.5所示的下游引物組成，所述霍亂弧菌O1群抗原基因檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID
NO.6所示；所述霍亂弧菌O139群抗原基因檢測引物由核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的上
游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的下游引物組成，所述霍亂弧菌O139群抗原基因
檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述霍亂弧菌腸毒素基因檢測引物由核苷酸
序列如SEQ ID NO.10所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的下游引物組成，
所述霍亂弧菌腸毒素基因檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；所述霍亂弧菌溶血
素基因檢測探針、霍亂弧菌O1群抗原基因檢測探針、霍亂弧菌O139群抗原基因檢測探針和
霍亂弧菌腸毒素基因檢測探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。
2.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述霍亂弧
菌溶血素基因檢測探針5’端標記的熒光報告基團為FAM熒光基團，3’端標記的熒光淬滅基
團為BHQ-1。
3.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述霍亂弧
菌O1群抗原基因檢測探針5’端標記的熒光報告基團為CY5熒光基團，3’端標記的熒光淬滅
基團為BHQ-3。
4.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述霍亂弧
菌O139群抗原基因檢測探針5’端標記的熒光報告基團為HEX熒光基團，3’端標記的熒光淬
滅基團為BHQ-1。
5.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述霍亂弧
菌腸毒素基因檢測探針5’端標記的熒光報告基團為Cal Red 610熒光基團，3’端標記的熒
光淬滅基團為BHQ-2。
6.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒
還含有dNTP、MgCl₂、PCR緩沖液、Taq DNA聚合酶、無菌水。
7.根據權利要求1所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒
還含有陽性對照或陰性對照中的一種或多種。
8.如權利要求1～7任一權利要求所述的霍亂弧菌多重熒光PCR檢測試劑盒在制備霍亂
弧菌檢測產品中的用途。