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一種快速檢測重金屬鉛離子的免疫學方法與試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-03
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201010539824.8 
  • 技術(專利)名稱 一種快速檢測重金屬鉛離子的免疫學方法與試劑盒 
  • 項目單位 暨南大學
  • 發明人 江天久,包財,秦超,王曄 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢自濼
  • 發布時間 2022-02-03  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種快速檢測重金屬鉛離子的免疫學方法與試劑盒。該免疫學方法為間接酶聯免疫技術,即通過人工合成抗原包被無鉛抗原結合樣品中的鉛離子,形成含鉛抗原;含鉛抗原與抗鉛單克隆抗體反應形成抗原-鉛-抗體結構鏈;接著再與酶標記的二抗反應,形成抗原-鉛-抗體-二抗的結構鏈;通過顯色反應,由顯色程度判斷所檢樣品中的鉛離子含量。實現該免疫學方法的試劑盒包含包被好人工抗原并封閉的ELISA酶標板和抗鉛單克隆抗體,人工抗原指的是CHX-A”-DTPA-OVA;抗鉛單克隆抗體由保藏日期為2010年8月25日、保藏編號為CCTCC C201084、名稱6H8/4F7的單克隆細胞株產生。本發明首次將間接酶聯免疫檢測技術用于小分子檢測中,檢測效果好。
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  • 02

    說明書

    1.一種快速檢測重金屬鉛離子的的免疫學方法,其特征在于包含以下步驟:采用間接酶聯免疫技術,即通過人工合成抗原包被,與人工合成抗原結合樣品中的鉛離子反應,形成含鉛抗原;含鉛抗原與抗鉛單克隆抗體反應形成抗原-鉛-抗體結構鏈;接著再與酶標記的二抗反應,形成抗原-鉛-抗體-二抗的結構鏈;然后通過顯色反應,由顯色程度判斷所檢樣品中的鉛離子含量;所述抗鉛單克隆抗體由保藏日期為2010年8月25日、保藏編號為CCTCC?C201084、名稱為雜交瘤細胞株6H8/4F7的單克隆細胞株產生;所述的人工合成抗原指的是CHX-A”-DTPA-OVA,該人工合成抗原是由OVA偶聯重金屬螯合劑CHX-A”-DTPA,經室溫振蕩反應24小時候,采用超濾法純化而得。2.根據權利要求1所述的免疫學方法,其特征在于:所述免疫學方法,更具體包含以下步驟:將人工合成抗原CHX-A”-DTPA-OVA包被于酶標板微孔內,加入量為100~400ng/well;接著封閉,再加入待檢樣品,于37℃反應至少5min,PBST溶液洗滌,再加入抗鉛單克隆抗體,每孔加入100~500ng,于37℃孵育至少30min;再用PBST溶液洗滌,加入酶標記的羊抗鼠IgG,加入量為每孔10~12.5ng/well,于37℃孵育至少30min后用PBST溶液洗滌,再加入底物進行顯色反應,根據顯色的深淺對樣品中鉛離子含量進行定性和半定量分析。3.根據權利要求2所述的免疫學方法,其特征在于:所述的封閉是使用質量百分比3%的牛血清白蛋白溶液進行封閉,37℃孵育1h。4.根據權利要求2所述的免疫學方法,其特征在于:所述PBST溶液的組成為由0.01M、pH值為7.4的PBS緩沖液與Tween-20按體積比1000:0.5混合得到。5.根據權利要求2所述的免疫學方法,其特征在于:所述酶標記的羊抗鼠IgG為辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG。6.實現權利要求1~5任一項所述免疫學方法的試劑盒,包含包被好人工抗原并封閉的ELISA酶標板、抗鉛單克隆抗體、酶標記的羊抗鼠IgG和底物,其特征在于:所述人工抗原指的是CHX-A”-DTPA-OVA;所述抗鉛單克隆抗體由保藏日期為2010年8月25日、保藏編號為CCTCC?C201084、名稱雜交瘤細胞株6H8/4F7的單克隆細胞株產生。7.根據權利要求6所述的試劑盒,其特征在于:所述包被好人工抗原并封閉的ELISA酶標板通過以下步驟制備得到:將人工合成抗原CHX-A”-DTPA-OVA包酶標板微孔內,加入量為100ng/well;接著用質量百分比為3%的BSA封閉,于37℃孵育1h,于吸水紙上拍干,用PBST溶液洗滌得到。8.根據權利要求6所述的試劑盒,其特征在于:所述酶標記的羊抗鼠IgG為HRP標記的羊抗鼠IgG,濃度為100ng/ml。9.根據權利要求6所述的試劑盒,其特征在于:所述的底物為3,3',5,5'-四甲基聯苯胺,濃度為100~150μg/ml。
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