一種檢測生鮮乳中摻有復原乳的快速檢測試劑盒，其特征在于，試劑盒包括以下成分：1）膽固醇氧化物系列標準品；2）包被有包被原的酶標板；3）特異性結合物溶液；4）酶標記物溶液；5）顯色底物；6）終止液；7）濃縮洗液。其中，所述的膽固醇氧化物為7?酮基膽固醇、7α羥基膽固醇、25α羥基膽固醇的任何一種；所述包被原為上述任何一種化合物與載體蛋白偶聯的包被原；所述特異性結合物為上述化合物的相應單克隆抗體或者多克隆抗體，或者是能與上述化合物特異性結合的蛋白，如膽固醇氧化物及衍生物結合蛋白（oxysterol binding protein，OBP）。針對當前乳品質量監管的復雜形勢，利用本發明可在基層檢測和政府監管中發揮重大作用。

1.一種檢測生鮮乳中摻有復原乳的快速檢測試劑盒，通過檢測樣本中的7-酮基膽固醇而判定樣本是否摻有復原乳，其復原乳摻假檢測限為0.5％，所述試劑盒特征在于，包括以下成分：1)7-酮基膽固醇標準品6瓶，濃度分別為：0、1、5、15、45、100μg/L；2)包被有包被原的酶標板，所述包被原為7-酮基膽固醇與琥珀酸酐的反應產物7-kc-SA與卵清蛋白的偶聯物；免疫原為7-kc-SA與血藍蛋白的偶聯物；3)特異性結合物溶液：7-酮基膽固醇特異性單克隆抗體；4)酶標記物溶液：酶標的OBP單克隆抗體或者OBP多克隆抗體；5)TMB顯色底物；6)終止液：低濃度硫酸溶液；7)濃縮洗液：添加有吐溫-20的PBS溶液；8)生鮮質控品：生鮮牛乳；9)復原乳質控品：復原牛乳；所述7-酮基膽固醇與琥珀酸酐的反應產物7-kc-SA的合成過程為：稱取7-酮基膽固醇100mg，溶解于20mLDMF中，加入琥珀酸酐25mg、無水吡啶50mL，加熱回流反應24h，采用薄層色譜監測反應進程，最后減壓蒸餾出去有機溶劑，所得即為半抗原7-kc-SA，合成所用7-酮基膽固醇與琥珀酸酐的摩爾比為1:1；7-酮基膽固醇抗體的制備及純化：將7-kc-SA與KLH(血藍蛋白)偶聯抗原按照250μg/每只的量，與等量佐劑乳化后，皮下多點注射免疫若干只新西蘭兔，免疫間隔為2周，3次免疫后以直接ELISA測定血清效價，同時以間接競爭ELISA測定血清抑制率，篩選靈敏度合適的血清作為ELISA檢測試劑盒用的抗體，制備好的抗體經過飽和硫酸銨沉淀后，以ProteinG親和層析柱純化，測定蛋白濃度后分裝凍存；酶標抗體的制備：(1)稱取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，室溫靜置過夜；(2)反應后的酶溶液經SephadexG-25層析柱，用生理鹽水洗脫；流速控制在1ml/min，收集棕色流出液；放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌；(3)將待標記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中；(4)用1M pH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續攪拌3小時；(5)加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時；(6)在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃1小時；(7)3000rpm離心半小時，棄上清，沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH7.4的PBS中；(8)將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M pH7.4的PB緩沖鹽水透析，去除銨離子后，用萘氏試劑檢測合格，10000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶標抗體，分裝后，冰凍保存；試劑盒的使用方法為：(1)將濃度分別為0、1、5、15、45、100μg/L的7-酮基膽固醇標準品以50μL每孔加入酶標板，同時準備好的樣品、質控品也按照此量加入；(2)加入特異性單克隆抗體50μL每孔，室溫在19-25℃，孵育30min，取出后以PBST洗板3次，拍干；(3)加入HRP酶標二抗50μL每孔，室溫孵育15min，洗板3次，拍干；(4)加入TMB單組份顯色底物100μL每孔，室溫孵育15min；(5)加入終止液50μL，以酶標儀450/630nm讀取吸光度值；(6)以數據分析軟件計算檢測結果。2.如權利要求1所述的檢測試劑盒在檢測生鮮乳中摻復原乳的應用。