本發(fā)明涉及免疫學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種使用磁微粒化學(xué)發(fā)光定量檢測抗SS?B抗體IgG的試劑盒及其制備方法和檢測方法。本發(fā)明提供的一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測抗SS?B抗體IgG的試劑盒，包括Anti?SS?B IgG校準(zhǔn)品、Anti?SS?B IgG試劑1號、Anti?SS?B IgG試劑2號、Anti?SS?B IgG磁分離試劑、Anti?SS?B IgG質(zhì)控品和清洗液。本發(fā)明還公開了上述試劑盒的制備和檢測方法。該檢測方法在傳統(tǒng)的膜條免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法的基礎(chǔ)上，將靈敏度和線性范圍再提高了3?5個數(shù)量級、實(shí)現(xiàn)了定量檢測，具有敏感度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、成本低、操作簡便和結(jié)果判斷客觀優(yōu)點(diǎn)，并配合全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀實(shí)現(xiàn)全自動使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1.一種使用磁微粒化學(xué)發(fā)光定量檢測抗SS-B抗體IgG的試劑盒的制備方法，其特征在
于，所述制備方法包括：
步驟1.制備Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品包括Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品稀釋液配制步驟和Anti-
SS-B IgG校準(zhǔn)品配制步驟：
所述Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品稀釋液的配制步驟包括：
加800mL純化水和11.2g的Tris到容器中，攪拌混合均勻，再加8.5g的氯化鈉和2mL的
Proclin300，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為7.0-7.5，加40g的牛血清白蛋白到容器中，攪拌
至完全溶解，再將pH值調(diào)為7.0-7.5，用純化水定容至1L，使用0.2μm濾器過濾，將獲得的所
述校準(zhǔn)品稀釋液保存在2-8℃待用；
所述Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品的配制步驟包括：
用上述Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品稀釋液將抗SS-B抗體IgG分別配制為0、5、20、50、100、
200RU/mL共6個濃度點(diǎn)；
步驟2.制備Anti-SS-B IgG試劑1號包括Anti-SS-B IgG試劑1號稀釋液配制步驟和
Anti-SS-B IgG試劑1號配制步驟：
所述Anti-SS-B IgG試劑1號稀釋液的配制步驟：
加800mL純化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中，攪拌至完全溶解，再加入2mL
的Proclin300，攪拌至完全溶解，再加入5g的牛血清白蛋白，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為
7.0-7.5，用純化水定容至1L，使用0.2μm濾器過濾，將獲得的所述試劑1號稀釋液保存在2-8
℃待用；
所述Anti-SS-B IgG試劑1號的配制步驟：
用0.2mol/L的pH9.0碳酸鹽緩沖液配制0.5mg/mL的生物素溶液，按照SS-B抗原與生物
素溶液質(zhì)量比為10:1的比例在SS-B抗原溶液中加入到上述0.5mg/mL的生物素溶液，混合均
勻，室溫靜置18h，反應(yīng)生成SS-B抗原-生物素連接物的反應(yīng)液，將得到的SS-B抗原-生物素
連接物反應(yīng)液通過G-25凝膠柱進(jìn)行分離，除去未反應(yīng)的生物素，得到SS-B抗原-生物素連接
物，再用所述試劑1號稀釋液將SS-B抗原-生物素連接物稀釋到0.1-0.3μg/mL，得到所述的
試劑1號；
步驟3.制備Anti-SS-B IgG試劑2號包括：Anti-SS-B IgG試劑2號稀釋液配制步驟和
Anti-SS-B IgG試劑2號的配制步驟：
所述Anti-SS-B IgG試劑2號稀釋液的配制步驟：
加800mL純化水、6.06g的4-羥乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全溶解，
再加入5g的牛血清白蛋白、0.1g的ZnCl₂、0.2mL的Proclin 300和0.1g的MgCl₂，攪拌至完全
溶解，將pH值調(diào)為7.5-8.0，用純化水定容至1L，使用0.2um濾器過濾，將獲得的所述試劑2號
稀釋液保存在2-8℃待用；
所述Anti-SS-B IgG試劑2號的配制步驟：
將1mg的羊抗人抗體和2-4μL的10mg/mL的偶聯(lián)劑為2-亞胺四氫噻吩溶液，室溫靜置
20min，加入0.1mol/L的甘氨酸溶液10μL，室溫靜置5min，用G-25凝膠柱除鹽，收集活化后抗
體，將活化后的抗體保存在2-8℃?zhèn)溆?，?.5mg的堿性磷酸酶，加入5mg/mL的4-(N-馬來酰
亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯溶液10-20μL，室溫靜置30min，用G-25凝膠柱除
鹽，收集活化后堿性磷酸酶，將活化后的堿性磷酸酶保存在2-8℃?zhèn)溆?，再將上述活化的?br/>抗人抗體與活化的堿性磷酸酶混合，在2-8℃條件下靜置12-24h，用Supperdex200凝膠純化
柱純化，獲得羊抗人抗體-堿性磷酸酶連接物濃溶液，置于2-8℃保存?zhèn)溆茫瑢⒀蚩谷丝贵w-
堿性磷酸酶連接物濃溶液用所述試劑2號稀釋液稀釋到0.02-0.1μg/mL，得到所述的試劑2
號；
步驟4.制備Anti-SS-B IgG磁分離試劑包括Anti-SS-B IgG磁分離試劑稀釋液配制步
驟和Anti-SS-B IgG磁分離試劑配制步驟：
所述Anti-SS-B IgG磁分離試劑稀釋液配制步驟：
加800mL純化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全溶解，再加5g的牛血
清白蛋白、50mL的新生牛血清和0.2mL的Proclin300，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為7.9-
8.1，用純化水定容至1L，使用0.2μm濾器過濾，將獲得的所述磁分離試劑稀釋液保存在2-8
℃待用；
所述Anti-SS-B IgG磁分離試劑配制步驟：
取100mg磁微粒，磁分離去上清，取用0.025mol/L的pH值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸緩沖
液10mL重懸，室溫下混勻2～3h，加入0.5-1.0mL新配制的濃度為10mg/mL的碳二亞胺和N-羥
基硫代琥珀酰亞胺的嗎啉乙磺酸緩沖液，室溫振蕩混懸30-60min，使磁珠充分活化，磁分
離，去上清，用0.025mol/L的pH值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重懸，加入4-8mg的鏈
霉親和素，室溫混懸16-20h，再進(jìn)行磁分離，去上清，用百分比濃度0.5％的牛血清白蛋白，
百分比濃度0.5％脫脂奶粉和百分比濃度0.05％吐溫-20的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重懸，
室溫條件下混勻2～3h，再磁分離，去上清，用磁微粒緩沖液稀釋重懸到0.5mg/mL，在2～8℃
下平衡16～24h，室溫條件下混勻2～3h后，使用超聲振蕩儀將混懸液中聚集成團(tuán)的磁珠分
散成單顆粒狀態(tài)，得到所述Anti-SS-B IgG磁分離試劑；
所述制備方法包括清洗液的制備步驟：
加800mL純化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl于1L容器中，攪拌至完全溶解，再加入5g的
吐溫-20和5g的Triton100，攪拌，直至完全混勻，將pH值調(diào)為7.5-8.0，定容1L，使用0.2μm濾
器過濾，將獲得的所述清洗液保存在2-8℃待用，使用前將所述清洗液按照每7.5mL加純化
水至100mL比例稀釋并混勻。
2.一種使用如權(quán)利要求1的方法制備的磁微粒化學(xué)發(fā)光定量檢測抗SS-B抗體IgG的試
劑盒的檢測方法，包括以下步驟：
步驟1.將Anti-SS-B IgG校準(zhǔn)品放到全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測試位置，得到由全
自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出的擬合曲線；
步驟2.將Anti-SS-B IgG質(zhì)控品放到上述分析儀測試位置，得到由全自動化學(xué)發(fā)光免
疫分析儀輸出的質(zhì)控品的測試發(fā)光值和通過步驟1得到的擬合曲線擬合得到Anti-SS-B
IgG質(zhì)控品的濃度值；
步驟3.將待測樣本放到上述分析儀測試位置，由所述分析儀自動按1:20將樣本稀釋，
得到由全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出的待測樣本的濃度值。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種使用如權(quán)利要求1的方法制備的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢
測抗SS-B抗體IgG的試劑盒的檢測方法，其特征在于：所述步驟1、步驟2和步驟3均包括全自
動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的全自動檢測步驟:
步驟1)加20μL校準(zhǔn)品或質(zhì)控品或1:20稀釋后的待測標(biāo)本至檢測管中；
步驟2)加50μL的Anti-SS-B IgG試劑1號至步驟1)所述檢測管中，混勻后，37±0.5℃溫
育10min；
步驟3)加50μL的Anti-SS-B IgG磁分離試劑至步驟2)所述檢測管中，混勻后，37±0.5
℃溫育5min，進(jìn)行磁分離，去上清；
步驟4)加300μL的清洗液至檢測管中，混勻，進(jìn)行磁分離去上清；
步驟5)重復(fù)步驟4)兩遍；
步驟6)加150μL的Anti-SS-B IgG試劑2號至檢測管中，混勻后，37±0.5℃溫育10min，
進(jìn)行磁分離去上清；
步驟7)加300μL的清洗液至檢測管中，混勻，進(jìn)行磁分離去上清；
步驟8)重復(fù)步驟7)兩遍；
步驟9)加200μL的化學(xué)發(fā)光底物至檢測管中，混勻，檢測發(fā)光強(qiáng)度。