本發(fā)明公開了一種與肝癌預(yù)后相關(guān)的血清miRNA標(biāo)志物及其檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用。該腫瘤標(biāo)志物為人類肝癌患者相關(guān)的血清miR?29a?3p和miR?192?5p。本發(fā)明前期工作經(jīng)過高通量深度測(cè)序，篩選出了包含miR?29a?3p和miR?192?5p在內(nèi)的表達(dá)差異明顯的肝癌相關(guān)血清miRNA表達(dá)譜，并且經(jīng)定量PCR(qPCR)驗(yàn)證，最終確認(rèn)血清miR?29a?3p和miR?192?5p是肝癌危險(xiǎn)度(預(yù)后)相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物。本發(fā)明的標(biāo)志物和檢測(cè)試劑可用于制備快速檢測(cè)定量PCR試劑盒，具有檢測(cè)快速方便，準(zhǔn)確率高、無創(chuàng)傷等特點(diǎn)；并且miR?29a?3p、miR?192?5p及肝癌巴塞羅那分期(BCLC stage)三者聯(lián)合構(gòu)建的預(yù)后模型，可用于肝癌患者危險(xiǎn)度高低的分級(jí)分層，從而指導(dǎo)肝癌病人個(gè)體化治療。

1.一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，所述標(biāo)記物為miR-29a-3p和miR-192-5p的組合，所述miR-29a-3p序列信息如SEQ ID NO.1所示；miR-192-5p序列信息如SEQ ID NO.2所示。2.如權(quán)利要求1所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是，基于所述標(biāo)記物的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)模型公式為：Y＝2.19*A_{BCLC stage}+1.45*B_miR-192-5p+1.81*C_miR-29a-3p；A_{BCLC stage}取值0或1，0代表為早期，1代表為晚期；B_miR-192-5p取值0或1，0代表miR-192-5p為低表達(dá)，表達(dá)量2^-△△CT<2.24；1代表其為高表達(dá)，表達(dá)量2^-△△CT≥2.24；C_miR-29a-3p取值0或1，0代表miR-29a-3p為低表達(dá)，表達(dá)量2^-△△CT<1.37；1代表其為高表達(dá)，表達(dá)量2^-△△CT≥1.37；當(dāng)Y值<1.81時(shí)為患者生存風(fēng)險(xiǎn)低危，Y值>1.81時(shí)，患者為生存風(fēng)險(xiǎn)中高危。3.如權(quán)利要求1所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：試劑盒包括用于配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的試劑、用于配制qPCR反應(yīng)體系的試劑和用于配制內(nèi)參體系的試劑；其中，用于配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的試劑至少包括分別針對(duì)miR-29a-3p、miR-192-5p和線蟲cel-miR-39的特異性莖環(huán)法反轉(zhuǎn)錄引物液；用于配制qPCR反應(yīng)體系的試劑至少包括分別針對(duì)miR-29a-3p、miR-192-5p和線蟲cel-miR-39的正向引物液和反向通用引物液；用于配制內(nèi)參體系的試劑包括內(nèi)參cel-miR-39液，cel-miR-39的序列信息如SEQ ID NO.3所示。4.如權(quán)利要求3所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：所述用于配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的試劑還包括反轉(zhuǎn)錄酶液、dNTP混合液、核糖核酸酶抑制劑液、反轉(zhuǎn)錄緩沖液和無核酸酶純水。5.如權(quán)利要求3所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：所述反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的總體積為25μl；其中，總RNA樣品2μl、特異性莖環(huán)法反轉(zhuǎn)錄引物液2μl、反轉(zhuǎn)錄酶液0.5μl、dNTP混合液2μl、核糖核酸酶抑制劑液0.5μl、反轉(zhuǎn)錄緩沖液5μl和無核酸酶純水13μl；所述總RNA樣品中含有內(nèi)參cel-miR-39液。6.如權(quán)利要求5所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：所述總RNA樣品的制備，是在抽提250μl血清總RNA過程中加入的體積為2μl的內(nèi)參cel-miR-39液，所述內(nèi)參cel-miR-39液使用濃度為0.05pmol/μl。7.如權(quán)利要求3所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：用于配制qPCR反應(yīng)體系的試劑還包括SYBR Green混合液、ROX Reference Dye II液和純水。8.如權(quán)利要求7所述的一種肝癌預(yù)后標(biāo)記物在制備用于評(píng)估肝癌預(yù)后危險(xiǎn)度的肝癌血清miRNA檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征是：所述qPCR反應(yīng)體系的總體積為20μl；其中，所述SYBRGreen混合液的體積是9μl，所述正向引物液的體積是0.8μl，所述反向通用引物液的體積是0.8μl，所述ROX Reference Dye II液0.4μl，cDNA模板是4μl，其余是純水；所述正向引物液的使用濃度為5μM，所述反向通用引物液的使用濃度為5μM；所述cDNA模板是所述反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系反應(yīng)后的產(chǎn)物。