本發(fā)明公開了一種快速恒溫檢測蠟樣芽孢桿菌的方法、引物組及試劑盒。所述方法為：從待測樣品中提取基因組DNA；以所述基因組DNA為模板，以能擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌特異性序列的引物組為引物，在酶反應(yīng)體系下進(jìn)行恒溫擴(kuò)增反應(yīng)；通過判斷反應(yīng)結(jié)果是否為陽性，確定待測樣品中是否存在蠟樣芽孢桿菌。本發(fā)明檢測方法具有高靈敏度和高特異性，檢測時間短，結(jié)果判定簡單，操作便捷，成本低，具廣泛應(yīng)用前景。

1.一種非診斷目的的快速恒溫檢測蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)從待測樣品中提取基因組DNA；(2)以所述基因組DNA為模板，以能擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌基因組特異性堿基序列的引物組作為引物，在酶反應(yīng)體系下進(jìn)行恒溫擴(kuò)增反應(yīng)；(3)通過判斷反應(yīng)結(jié)果是否為陽性，確定待測樣品中是否存在蠟樣芽孢桿菌；其中，所述蠟樣芽孢桿菌基因組特異性堿基序列為GI號為218895141的蠟樣芽孢桿菌基因組的3193434～3194011bp位序列；其中，所述能擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌基因組特異性堿基序列的引物組為引物組A；引物組A：上游外引物F3_A：5’-AGGAACTATTAGAAAACGCG-3’(SEQ ID NO：1)；下游外引物B3_A：5’-CCGGTTTAGATAATTCACGT-3’(SEQ ID NO：2)；上游內(nèi)引物FIP_A：5’-CTAGCGCCTTTGTATGTTCCTCGCAGAGGTTTTAGAAGTTC-3’(SEQ IDNO：3)；下游內(nèi)引物BIP_A：5’-CCACAGAACACAAATGTAACTCATGAATGTTTCTCTCCCTTTCCT-3’(SEQID NO：4)。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述酶反應(yīng)體系包括：1×BstDNA聚合酶反應(yīng)緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP_A和BIP_A引物，0.15-0.3μmol/L的F3_A和B3_A引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜堿。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)程序為：①60～65℃孵育10～90min；②80℃終止反應(yīng)2～20min。4.用于如權(quán)利要求1所述恒溫檢測蠟樣芽孢桿菌方法中的引物，其特征在于，所述引物為能擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌基因組特異性堿基序列的引物組，其序列為GI號為218895141的蠟樣芽孢桿菌基因組的3193434～3194011bp位的核酸序列的一部分或其互補鏈的一部分；所述能擴(kuò)增蠟樣芽孢桿菌基因組特異性堿基序列的引物組為引物組A；引物組A：上游外引物F3_A：5’-AGGAACTATTAGAAAACGCG-3’；下游外引物B3_A：5’-CCGGTTTAGATAATTCACGT-3’；上游內(nèi)引物FIP_A：5’-CTAGCGCCTTTGTATGTTCCTCGCAGAGGTTTTAGAAGTTC-3’；下游內(nèi)引物BIP_A：5’-CCACAGAACACAAATGTAACTCATGAATGTTTCTCTCCCTTTCCT-3’。5.引物在非診斷目的的恒溫檢測蠟樣芽孢桿菌中的應(yīng)用，其特征在于，所述引物為如權(quán)利要求4所述的引物。