本公開內(nèi)容提供了用于使血液樣品成像的方法以及用于實施所述方法的試劑盒與系統(tǒng)。方法包括將包括紅細胞的細胞懸浮液引入到載體的基底表面上，所述載體具有大于或等于當在所述基底載體上時所述細胞懸浮液的垂直深度(h)的垂直高度(H)，所述細胞懸浮液包括通過定義的函數(shù)確定的細胞濃度(C)；使在細胞懸浮液中的細胞(不在其上施加任何力)沉降到載體的所述基底表面上以在載體的基底表面上形成細胞單層；以及獲取細胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像；其中通過設置為不大于沉降在所述基底表面上時細胞懸浮液的垂直高度的20％的景深(DOF)的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。

1.一種用于使血液樣品成像的方法，所述方法包括：
-將包括紅細胞的細胞懸浮液引入到載體的基底表面上，所述載體具有大于或等于當
在所述基底表面上時所述細胞懸浮液的垂直高度h的垂直高度H；
-使所述細胞懸浮液中的細胞沉降在所述載體的所述基底表面上以在所述載體的基底
表面上形成細胞單層，所述細胞懸浮液具有濃度C，所述濃度C是這樣的，當使所述細胞懸浮
液中基本上所有的細胞沉降在所述載體的所述基底表面上以形成所述細胞單層時，在所述
基底表面上形成單層而在細胞間基本上無重疊；以及
-獲取所述細胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像，
其中，通過設置為不超過當沉降到所述基底表面上時所述細胞懸浮液的垂直高度的
20％的景深的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述垂直高度h在20μm與1000μm之間。
3.如權利要求1所述的方法，其中通過設置為不大于當沉降在所述基底表面上時所述
細胞懸浮液的垂直高度的15％的景深的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述景深在0.5μm與10μm之間。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述景深在0.5μm與5μm之間。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞是人細胞。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞包括至少50％紅細胞。
8.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞包括至少75％紅細胞。
9.如權利要求1所述的方法，包括以稀釋因子D稀釋包括所述紅細胞的樣品以獲得所述
細胞懸浮液，所述稀釋因子D是稀釋前每一ml細胞的濃度C₀與所述濃度C的函數(shù)。
10.如權利要求9所述的方法，其中通過以下函數(shù)確定所述稀釋因子D：
11.如權利要求9所述的方法，其中樣品是血液樣品且所述稀釋因子D在50與300之間。
12.如權利要求9所述的方法，其中所述稀釋因子D在75與200之間。
13.如權利要求9所述的方法，其中所述稀釋因子D為約100。
14.如權利要求1所述的方法，包括通過稀釋包括紅細胞的血液樣品生成所述細胞懸浮
液以獲得所述細胞懸浮液中的細胞濃度C，使得在沉降到所述基底表面上后，細胞的密度在
10,000至30,000個細胞/mm²之間。
15.如權利要求14所述的方法，所述稀釋包括使所述細胞懸浮液形成為具有在0.4與
0.9之間的平均基底表面覆蓋度的單層。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述平均基底表面覆蓋度在0.4與0.6之間。
17.如權利要求1所述的方法，包括選擇提供所述景深的顯微鏡物鏡透鏡，其中所述透
鏡允許獲取在其任一維度不大于3μm長的至少一個物體的圖像。
18.如權利要求17所述的方法，其中所述透鏡允許獲取具有相對于所述基底表面不大
于3μm的高度的至少一個物體的圖像。
19.如權利要求1所述的方法，包括分析所述至少一幅圖像以基于所述至少一幅圖像確
定所述細胞懸浮液中病原體的存在或不存在。
20.如權利要求19所述的方法，其中所述細胞的至少一部分感染了病原體。
21.如權利要求19所述的方法，其中所述病原體是寄生蟲。
22.如權利要求21所述的方法，其中所述寄生蟲是血液感染原生動物。
23.如權利要求22所述的方法，其中所述血液感染原生動物選自由錐蟲屬
(Trypanosoma)、瘧原蟲屬(Plasmodium)、弓形蟲屬(Toxoplasma)和巴貝蟲屬(Babesi)組成
的屬。
24.如權利要求22所述的方法，其中所述血液感染原生動物是選自由惡性瘧原蟲
(P.falciparum)、間日瘧原蟲(P.vivax)、卵形瘧原蟲(P.ovale)、三日瘧原蟲(P.malariae)
和諾氏瘧原蟲(P.knowlesi)組成的組的瘧原蟲。
25.如權利要求1所述的方法，包括應用所述載體中的至少部分上部表面，將所述至少
部分上部表面放置在預期的垂直高度h。
26.如權利要求25所述的方法，還包括在上部表面和所述至少部分表面之間放置一個
或更多個間隔物。
27.如權利要求1所述的方法，包括在將所述細胞懸浮液引入到所述載體上之前、在使
所述細胞沉降之前或在獲取所述至少一幅顯微圖像之前將所述細胞與一種或更多種染色
劑混合。
28.如權利要求27所述的方法，其中所述一種或更多種染色劑的至少一種是熒光染色
劑且其中所述至少一幅顯微圖像包括用于檢測使用所述熒光染色劑染色的熒光圖像。
29.如權利要求1所述的方法，包括使所述細胞以每μm垂直高度h約1秒鐘的時間段沉降
在所述基底表面上藉以形成所述單層。
30.如權利要求1所述的方法，包括允許用于所述細胞沉降在所述基底表面上作為單層
的少于5分鐘的時間段。
31.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和1000μm
之間。
32.如權利要求1所述的方法，其中所述垂直高度H在20μm至300μm之間。
33.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和300μm之
間。
34.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和250μm之
間。
35.如權利要求1所述的方法，包括獲取多幅顯微圖像，所述多幅顯微圖像的至少兩幅
在不同的條件下提供，所述條件包括使所述基底表面的不同部分成像和不同的照射條件。
36.一種試劑盒，所述試劑盒包括：
-載體，所述載體包括基底表面，所述載體具有垂直高度H；以及
-用于執(zhí)行以下步驟的使用說明：
-從包括紅細胞的血液樣品提供細胞懸浮液，所述細胞懸浮液具有細胞濃度C；
-將所述濃度C的細胞懸浮液引入到所述載體的基底表面上，當在所述載體中時所述細
胞懸浮液具有所述垂直高度h，所述垂直高度h小于或等于所述垂直高度H；
-使所述細胞懸浮液中的細胞沉降到所述載體的所述基底表面上以在所述基底表面上
形成細胞單層，細胞濃度C是這樣的，當使所述細胞懸浮液中基本上所有的細胞沉降到所述
載體的所述基底表面上以形成所述細胞單層時，在所述基底表面上形成單層而在細胞間基
本上無重疊；
-獲取所述細胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像，
其中通過將顯微鏡設置為不超過當沉降到所述基底表面上時所述細胞懸浮液的垂直
高度的20％的景深獲得所述至少一幅顯微圖像。
37.如權利要求36所述的試劑盒，其中所述使用說明用于執(zhí)行如權利要求1至35中任一
項所述的方法。
38.一種用于使血液樣品成像的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：
-一個或更多個容器單元，所述一個或更多個容器單元用于分別容納包括至少一種血
細胞稀釋劑的一種或更多種樣品處理劑；
-血液樣品制備單元，所述血液樣品制備單元與所述一個或更多個容器單元流體連通
且被配置為接收包括紅細胞的血液樣品及至少一種血細胞稀釋劑的用量并由此形成血細
胞懸浮液，所述至少一種細胞稀釋劑的用量確定為以稀釋因子D稀釋所述血液樣品以便提
供細胞濃度C；
-載體，包括基底表面，所述載體被配置為攜載所述血細胞懸浮液，并且所述載體具有
被配置為大于或等于當在所述基底表面上時所述細胞懸浮液的垂直高度h的垂直高度H；
-顯微圖像獲取單元，所述顯微圖像獲取單元用于獲取當在所述載體的所述基底表面
上時所述血細胞懸浮液的至少一幅圖像；
-控制單元，所述控制單元被配置為：
-提供稀釋所述血液樣品的稀釋因子D，因子D是預期的基底表面覆蓋度F、細胞血細胞
的平均細胞尺寸d和所述血細胞懸浮液的所述垂直高度h的函數(shù)，稀釋因子D提供當使所述
細胞懸浮液中基本上所有的細胞沉降時，在所述載體的所述基底表面上形成細胞單層而在
細胞間基本上無重疊；以及
-通過所述顯微圖像獲取單元獲取所述血液細胞懸浮液的至少一幅顯微圖像，所述顯
微圖像獲取單元被設置為不大于當沉降到所述基底表面上時所述血液細胞懸浮液的垂直
高度的20％的景深。
39.如權利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述一種或更多種樣品處理劑包括一種或更多種
染色劑。
40.如權利要求39所述的系統(tǒng)，其中所述至少一種血液細胞稀釋劑的至少一種包括所
述一種或更多種染色劑。
41.如權利要求40所述的系統(tǒng)，其中至少一種染色劑是熒光染色劑。
42.如權利要求41所述的系統(tǒng)，其中所述至少一種染色劑選自由吖啶橙、赫希斯特家
族、分子信標、Sytox或4',6-二脒基-2-苯基吲哚組成的組。
43.如權利要求38所述的系統(tǒng)，包括流體抽取機構，所述流體抽取機構用于從血液來源
抽取血細胞的樣品以及將所述血細胞的樣品引入所述血液樣品制備單元。
44.如權利要求38所述的系統(tǒng)，包括細胞計數(shù)單元，所述細胞計數(shù)單元用于計數(shù)由所述
血液樣品制備單元接收的細胞。
45.如權利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述血液樣品制備單元包括攪拌單元，所述攪拌單
元被配置為使所述血液細胞懸浮液中的細胞均勻地分布。
46.如權利要求38所述的系統(tǒng)，包括輸出端口，所述輸出端口用于輸出所述至少一幅顯
微圖像或與所述至少一幅顯微圖像對應的數(shù)據(jù)。
47.如權利要求38所述的系統(tǒng)，包括存儲單元，所述存儲單元通過所述控制單元可訪問
并包括指示一個或更多個輸入?yún)?shù)的數(shù)據(jù)。
48.如權利要求47所述的系統(tǒng)，其中所述數(shù)據(jù)還包括用于一個或更多個輸入?yún)?shù)的所
述血液樣品中的細胞類型并且所述數(shù)據(jù)通過所述控制單元可訪問。
49.如權利要求38所述的系統(tǒng)，包括處理器，所述處理器被配置為分析所述至少一幅顯
微圖像以基于所述至少一幅顯微圖像確定所述血液細胞懸浮液中的病原體的存在或不存
在。
50.如權利要求49所述的系統(tǒng)，其中所述病原體是寄生蟲。
51.如權利要求38所述的系統(tǒng)，其中將所述控制單元配置為使所述顯微圖像獲取單元
獲取所述單層的多幅顯微圖像，所述多幅顯微圖像的至少兩幅在不同的條件下提供，所述
條件包括所述單層的不同部分和不同的照射條件。