本發(fā)明提供了一種診斷家畜血吸蟲病斑點金滲濾試劑盒其制備及應用方法，屬新型的免疫標記技術和家畜血吸蟲病免疫學診斷技術。本發(fā)明將膠體金直接標記在日本血吸蟲抗原蛋白質(zhì)上，適用于牛、羊、豬、兔等多種動物血吸蟲病抗體的檢測；在應用時僅需將被檢家畜血樣干紙浸出液，點在硝酸纖維素膜上作為固定相，再滴加血吸蟲抗原膠體金2～3滴(100～150μl)，2分鐘內(nèi)即形成肉眼可見的紅色斑點，結果判斷容易，一個反應盒可做4份待檢血樣，降低了檢測成本，提高了效率，具有敏感、特異、檢出率高，省工、省時、成本低等優(yōu)點。與糞孵血吸蟲毛蚴法相比，陽性符合率達100％，陰性符合率99.2％。

1.診斷家畜血吸蟲病斑點金滲濾試劑盒，包括盒體、內(nèi)置反應盒，黑色試劑瓶、生理鹽水瓶、玻璃毛細管及標準陽性血紙、陰性血紙，其特征是所述反應盒由盒底、盒蓋組成的塑料小盒，盒蓋中央有一直徑0.8cm圓孔，盒內(nèi)裝滿吸水墊料、緊貼盒蓋圓孔內(nèi)放一層1.1×1.1cm硝酸纖維素膜，緊閉盒蓋即成反應盒；所述黑色試劑瓶內(nèi)裝有血吸蟲抗原膠體金；所述血吸蟲抗原膠體金能與待測感染血吸蟲家畜的血樣浸出液反應形成紅色陽性斑點；所述血吸蟲抗原膠體金按以下工藝步驟制備而成：(1)膠體金的制備以1％氯金酸、1％檸檬酸三鈉、1％鞣酸、25mMK₂CO₃及雙蒸水為原料，先將1％氯金酸與雙蒸水按體積比1∶79配成A液；將1％檸檬酸三鈉、1％鞣酸、25mMK₂CO₃與雙蒸水按體積比4∶0.03～0.15∶0.03～0.15∶15.70～15.94配成B液；再將A液、B液在水浴內(nèi)同時加熱到59～61℃，攪拌A液，快速加入B液，繼續(xù)攪拌1分鐘，在10～13分鐘內(nèi)加熱至沸騰，制成顆粒直徑D＝8～12nm的膠體金，該膠體金液顏色由黑→藍→紫→紅色時即成；(2)血吸蟲可溶性抗原與純化抗原的制備將日本血吸蟲卵研磨后，用0.85％NaCl溶液按重量配成5％溶液，置-25℃反復凍融7次，用超聲波處理該液20分鐘后，在4℃下以13000rpm離心60分鐘，吸取上清液為血吸蟲可溶性抗原；該可溶性抗原經(jīng)層析分離純化得血吸蟲純化抗原；再將該兩種抗原分別用雙蒸水進行透析去除鹽分后，即成血吸蟲可溶性抗原與血吸蟲純化抗原；(3)膠體金pH值的調(diào)整將步驟(1)膠體金液在包被前用0.25MK₂CO₃調(diào)整pH值為7.15～7.25；(4)血吸蟲抗原包被膠體金按體積重量比將步驟(3)膠體金液100ml與血吸蟲可溶性抗原1.16～1.52mg或與血吸蟲純化抗原0.58～0.76mg混合進行包被，攪拌10分鐘后，依次加入10％疊氮鈉96μl、10％牛血清白蛋白10μl、10％聚乙二醇30μl，攪勻后1500rpm/min離心30分鐘，吸收紅色上清液，即成血吸蟲抗原膠體金，并按量分裝于黑色試劑瓶內(nèi)。2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征是，其中所述配制膠體金的B液的組分與含量為1％檸檬酸三鈉4.0ml、1％鞣酸0.09ml、25mMK₂CO₃?0.09ml與雙蒸水15.82ml；制成的膠體金顆粒直徑為10＜D≤11nm；膠體金液pH值調(diào)為7.20；包被膠體金液的抗原采用血吸蟲可溶性抗原，膠體金液與抗原的體積重量比為100ml∶1.30mg。