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一種用于尖翅燕魚SSR多重PCR引物及其應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-21
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN202010122532.8 
  • 技術(專利)名稱 一種用于尖翅燕魚SSR多重PCR引物及其應用 
  • 項目單位 中國水產科學研究院南海水產研究所
  • 發明人 張殿昌,郭梁,楊靜文,劉寶鎖,張楠,郭華陽,朱克誠 
  • 行業類別 中藥材獲取-動物藥材養殖
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓福東
  • 發布時間 2022-01-21  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于尖翅燕魚SSR多重PCR引物,所述SSR多重PCR引物包括30對特異性引物,所述30對特異性引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:1~60所示。該引物多態性高,PCR產物穩定可靠。還公開了包括該引物的試劑盒、尖翅燕魚SSR多重PCR的方法以及上述引物、試劑盒在評估尖翅燕魚遺傳多樣性以及尖翅燕魚親子鑒定中的應用。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于尖翅燕魚SSR多重PCR引物,其特征是:所述SSR多重PCR引物包括30對特異性引物,分別為引物對Pte15,Pte52,Pte65,Pte66,Pte83,Pte84,Pte86,Pte131,Pte165,Pte183,Pte187,Pte214,Pte217,Pte243,Pte254,Pte258,Pte274,Pte308,Pte315,Pte331,Pte335,Pte382,Pte420,Pte457,Pte467,Pte499,Pte507,Pte528,Pte550和Pte578,其中每對引物包括一個正向引物和一個反向引物,所述30對特異性引物的堿基序列分別如SEQ IDNO:1~60所示;其中:引物對Pte15的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:1~2所示;引物對Pte52的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:3~4所示;引物對Pte65的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:5~6所示;引物對Pte66的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:7~8所示;引物對Pte83的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:9~10所示;引物對Pte84的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:11~12所示;引物對Pte86的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:13~14所示;引物對Pte131的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:15~16所示;引物對Pte165的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:17~18所示;引物對Pte183的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:19~20所示;引物對Pte187的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:21~22所示;引物對Pte214的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:23~24所示;引物對Pte217的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:25~26所示;引物對Pte243的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:27~28所示;引物對Pte254的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:29~30所示;引物對Pte258的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:31~32所示;引物對Pte274的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:33~34所示;引物對Pte308的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:35~36所示;引物對Pte315的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:37~38所示;引物對Pte331的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:39~40所示;引物對Pte335的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:41~42所示;引物對Pte382的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:43~44所示;引物對Pte420的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:45~46所示;引物對Pte457的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:47~48所示;引物對Pte467的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:49~50所示;引物對Pte499的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:51~52所示;引物對Pte507的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:53~54所示;引物對Pte528的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:55~56所示;引物對Pte550的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:57~58所示;引物對Pte578的正、反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO:59~60所示。2.根據權利要求1所述的用于尖翅燕魚SSR多重PCR引物,其特征是還包括4條熒光標記的通用引物M13、PQE-F、RV3和pVP16,所述通用引物M13、PQE-F、RV3和pVP16的堿基序列分別如SEQ ID NO:61~64所示,與其相配合的熒光標記分別為5-FAM、5-HEX、5-ROX和5-TAMRA。3.一種用于尖翅燕魚SSR多重PCR的試劑盒,其特征是:包括權利要求1中的30對特異性引物。4.根據權利要求3所述的用于尖翅燕魚SSR多重PCR的試劑盒,其特征是:還包括權利要求2中熒光標記的通用引物。5.一種尖翅燕魚微衛星熒光多重PCR的方法,其特征是包括以下步驟:(1)提取尖翅燕魚DNA:采集尖翅燕魚親本樣品和子代鰭條組織,提取基因組DNA;(2)合成特異性引物:篩選并合成權利要求1中的30對特異性引物,將30對特異性引物共分為三組,分別為G1組、G2組和G3組,其中G1組包括引物對Pte65,Pte83,Pte84,Pte131,Pte217,Pte315,Pte335,Pte382,Pte467,Pte550,Pte578,G2組包括引物對Pte86,Pte165,Pte187,Pte258,Pte274,Pte308,Pte331,Pte420,Pte528,G3組包括引物對Pte15,Pte52,Pte66,Pte183,Pte214,Pte243,Pte254,Pte457,Pte499,Pte507;(3)多重PCR擴增:利用步驟(2)中的三組特異性引物和權利要求2中的熒光標記通用引物對步驟(1)中的基因組DNA進行PCR擴增,得擴增產物;(4)親子鑒定:對擴增產物進行基因分型,利用基因分型結果對親本基因型和子代基因型進行分析,判定子代個體的父母本。6.根據權利要求5所述的尖翅燕魚微衛星熒光多重PCR的方法,其特征是:步驟(3)中PCR擴增時,G1組、G2組和G3組的反應體系分別如下所示:G1組多重PCR擴增反應體系為: G1組PCR體系反應物 含量 5μM Pte65.F 0.06μL 5μM Pte65.R 0.24μL 20μM Pte83.F 0.06μL 20μM Pte83.R 0.24μL 20μM Pte84.F 0.06μL 20μM Pte84.R 0.24μL 20μM Pte131.F 0.06μL 20μM Pte131.R 0.24μL 5μM Pte217.F 0.06μL 5μM Pte217.R 0.24μL 10μM Pte315.F 0.06μL 10μM Pte315.R 0.24μL 20μM Pte335.F 0.06μL 20μM Pte335.R 0.24μL 10μM Pte382.F 0.06μL 10μM Pte382.R 0.24μL 5μM Pte467.F 0.06μL 5μM Pte467.R 0.24μL 20μM Pte550.F 0.06μL 20μM Pte550.R 0.24μL 5μM Pte578.F 0.06μL 5μM Pte578.R 0.24μL 10μM M13 0.36μL 10μM PQE-F 0.36μL 10μM RV3 0.36μL 10μM pVP16 0.36μL 2mg/mL BSA- 0.45μL 50ng/μL DNA 2.0μL Taq HS,Takara 12.5μL ddH2O 5.31μL Total 25.0μL
    G2組多重PCR擴增反應體系為: G3組多重PCR擴增反應體系為: 7.根據權利要求5所述的尖翅燕魚微衛星熒光多重PCR的方法,其特征是:步驟(3)中PCR擴增時,采用的擴增程序為:98℃10s,57℃40s,72℃60s,35個循環;98℃10s,53℃40s,72℃60s,15個循環;最后72℃延伸30min。8.根據權利要求5所述的尖翅燕魚微衛星熒光多重PCR的方法,其特征是:步驟(4)中對擴增產物在ABI 3730XL基因分析儀上進行基因分型。9.權利要求1或權利要求2所述的SSR多重PCR引物或權利要求3或權利要求4中的試劑盒在評估尖翅燕魚遺傳多樣性和尖翅燕魚親子鑒定方面的應用。
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