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鑒定和選育PERV-pol基因缺陷型五指山小型豬新品系的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-19
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710418223.3 
  • 技術(專利)名稱 鑒定和選育PERV-pol基因缺陷型五指山小型豬新品系的方法 
  • 項目單位 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
  • 發明人 馬玉媛,章金剛,范瑞,趙雄,賈俊婷,王延琳,皇甫超濟,馮書堂 
  • 行業類別 中藥材獲取-動物藥材養殖
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭冠村
  • 發布時間 2021-12-19  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種鑒定和選育PERV?pol基因缺陷型五指山小型豬近交系新品系的方法。本發明保護物質甲在制備試劑盒中的應用;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述物質甲為用于檢測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因是否發生了提前終止的物質。采用本發明方法能夠準確鑒定待測豬是否為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系,可用于選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系新品系。
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  • 02

    說明書

    1.物質甲在制備試劑盒中的應用;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述物質甲為用于檢測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因是否發生了提前終止的物質;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。2.權利要求1中所述的物質甲和記載有判斷標準甲的載體在制備試劑盒中的應用;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述判斷標準甲為:如果某一五指山小型豬近交系個體的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該五指山小型豬近交系個體為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。3.一種試劑盒,包括物質甲;所述物質甲為用于檢測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因是否發生了提前終止的物質;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。4.一種鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系的方法,包括如下步驟:檢測待測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因;如果某一五指山小型豬近交系個體的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該五指山小型豬近交系個體為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。5.一種選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系的方法,包括如下步驟:(1)檢測待測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因;如果某一五指山小型豬近交系個體的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該五指山小型豬近交系個體為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;(2)步驟(1)得到的豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體之間交配,獲得后代,即為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。6.權利要求1中所述的物質甲、HEK293細胞、記載有方法甲的載體和記載有方法乙的載體在制備試劑盒中的應用;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述方法甲為“鑒定待測豬是否為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”的方法,包括如下步驟:①將來源于待測豬的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,鑒定所述HEK293細胞中是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,根據鑒定結果確定所述待測豬是否為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬為候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;若所述HEK293細胞中攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;②將來源于經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,繼續培養所述HEK293細胞30-60天,期間在細胞匯合時即行傳代,每次傳代時一方面收集所述HEK293細胞鑒定是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,另一方面收集細胞培養上清鑒定反轉錄酶活性,根據鑒定結果確定所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”是否確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若每次的鑒定結果均顯示所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,并且所述細胞培養上清無反轉錄酶活性,則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;反之則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;所述方法甲中,所述待測豬為五指山小型豬近交系;所述方法乙為“鑒定待測豬是否為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系”的方法,包括如下步驟:檢測待測豬的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因;如果某一待測豬的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該待測豬為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;所述方法乙中,所述待測豬為所述方法甲得到的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。7.一種試劑盒,包括物質甲、HEK293細胞、記載有權利要求6中所述方法甲的載體和記載有權利要求6中所述方法乙的載體;所述物質甲為用于檢測五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因是否發生了提前終止的物質;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子;所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系;(b)選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系。8.一種鑒定豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系的方法,包括如下步驟:①將來源于待測豬的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,鑒定所述HEK293細胞中是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,根據鑒定結果確定所述待測豬是否為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬為候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;若所述HEK293細胞中攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;②將來源于經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,繼續培養所述HEK293細胞30-60天,期間在細胞匯合時即行傳代,每次傳代時一方面收集所述HEK293細胞鑒定是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,另一方面收集細胞培養上清鑒定反轉錄酶活性,根據鑒定結果確定所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”是否確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若每次的鑒定結果均顯示所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,并且所述細胞培養上清無反轉錄酶活性,則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;反之則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;③檢測步驟②得到的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因;如果某一無PERV傳染性的五指山小型豬近交系個體的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該五指山小型豬近交系個體為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。9.一種選育豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系的方法,包括如下步驟:①將來源于待測豬的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,鑒定所述HEK293細胞中是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,根據鑒定結果確定所述待測豬是否為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬為候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;若所述HEK293細胞中攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,則所述待測豬不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;②將來源于經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系的PBMC與HEK293細胞共培養4-7天,去除所述PBMC,繼續培養所述HEK293細胞30-60天,期間在細胞匯合時即行傳代,每次傳代時一方面收集所述HEK293細胞鑒定是否攜帶或表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,另一方面收集細胞培養上清鑒定反轉錄酶活性,根據鑒定結果確定所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”是否確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系:若每次的鑒定結果均顯示所述HEK293細胞中不攜帶且不表達豬內源性反轉錄病毒的結構基因,并且所述細胞培養上清無反轉錄酶活性,則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”確實為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;反之則所述“經過所述步驟①獲得的候選的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系”不為無PERV傳染性的五指山小型豬近交系;③檢測步驟②得到的無PERV傳染性的五指山小型豬近交系的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因;如果某一無PERV傳染性的五指山小型豬近交系個體的全基因組中的豬內源性反轉錄病毒pol基因均發生了提前終止,該五指山小型豬近交系個體為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體;④步驟③得到的豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系個體之間交配,獲得后代,即為豬內源性反轉錄病毒pol基因缺陷型五指山小型豬近交系品系;所述提前終止指的是終止密碼子位于讀碼框第235-237位核苷酸;所述豬內源性反轉錄病毒pol基因為編碼框如序列表的序列10所示的DNA分子。
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