本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，提供一種培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基主要以甘油為碳源。本發(fā)明還提供了一種利用所述培養(yǎng)基生產(chǎn)丙酮酸氧化酶的方法。本發(fā)明首次揭示在生產(chǎn)丙酮酸氧化酶時(shí)利用甘油作為碳源，能夠使得重組大腸桿菌在發(fā)酵全過(guò)程持續(xù)表達(dá)丙酮酸氧化酶，極大地提高了丙酮酸氧化酶的產(chǎn)量；并且，采用本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中pH值穩(wěn)定，發(fā)酵工藝大大簡(jiǎn)化。

1.一種用于培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基含有碳源、氮源、磷源、無(wú)機(jī)鹽；所述的大腸桿菌中含有表達(dá)載體，所述的表達(dá)載體中含有丙酮酸氧化酶的表達(dá)盒；其特征在于，所述的培養(yǎng)基中碳源按照重量計(jì)算90％以上是甘油；其中，甘油????????????????6-18ml/L；蛋白胨??????????????12-20g/L；酵母提取物??????????10-16g/L；硫酸銨??????????????3-7g/L；硫酸鎂??????????????1-4g/L；磷酸鹽??????????????4-8g/L；氯化鈉??????????????6-15g/L。2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基的碳源是甘油。3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基含有：甘油????????????????8-16ml/L；蛋白胨??????????????12-16g/L；酵母提取物??????????10-12g/L；硫酸銨??????????????4-6g/L；硫酸鎂??????????????2-3g/L；磷酸鹽??????????????5-7g/L；氯化鈉??????????????8-12g/L。4.如權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的磷酸鹽是復(fù)合磷酸鹽，其中，按照重量計(jì)算K₂HPO₄∶Na₂HPO₄∶KH₂PO₄＝1∶2∶1。5.如權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基中還含有微量元素1-2.2ml/L；其中所述的微量元素含有：FeSO₄·7H₂O????12.8±3g/L；ZnSO₄·7H₂O????2.84±1g/L；CuSO₄·5H₂O????1.6±0.5g/L；MnSO₄·H₂O?????3.2±1g/L；CaCl₂??????????0.28±0.08g/L；CoCl₂·6H₂O????1.6±0.5g/L；H₃BO₄??????????0.24±0.08g/L；Na₂MoO₄????????12.8±3g/L；和KI?????????????0.16±0.05g/L。6.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的大腸桿菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD，其制備方法如下：以Aerococcus?viridans?ATCC?10400基因組為模板，采用SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2引物對(duì)，PCR擴(kuò)增得到AvPyOD基因，鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)鑒定獲得序列正確的AvPyOD擴(kuò)增產(chǎn)物；純化該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物；用限制性內(nèi)切酶NcoI和BamHI酶切上述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，將酶切后的產(chǎn)物連接入經(jīng)過(guò)NcoI和BglII酶切的質(zhì)粒pSML104中，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pSMLPyOD；將重組質(zhì)粒pSMLPyOD轉(zhuǎn)化E.coli?DH5α感受態(tài)細(xì)胞。7.權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基的用途，其特征在于，用于培養(yǎng)大腸桿菌，發(fā)酵生產(chǎn)丙酮酸氧化酶；其中，所述的大腸桿菌中含有表達(dá)載體，所述的表達(dá)載體中含有丙酮酸氧化酶的表達(dá)盒。8.一種生產(chǎn)丙酮酸氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：(1)利用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，獲得培養(yǎng)產(chǎn)物；其中，所述的大腸桿菌中含有表達(dá)載體，所述的表達(dá)載體中含有丙酮酸氧化酶的表達(dá)盒；(2)從步驟(1)獲得的培養(yǎng)產(chǎn)物中分離獲得丙酮酸氧化酶。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，培養(yǎng)時(shí)間是12-20小時(shí)；或者培養(yǎng)的溫度是28-37℃。10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的大腸桿菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD，其制備方法如下：以Aerococcus?viridans?ATCC?10400基因組為模板，采用SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2引物對(duì)，PCR擴(kuò)增得到AvPyOD基因，鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)鑒定獲得序列正確的AvPyOD擴(kuò)增產(chǎn)物；純化該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物；用限制性內(nèi)切酶NcoI和BamHI酶切上述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，將酶切后的產(chǎn)物連接入經(jīng)過(guò)NcoI和BglII酶切的質(zhì)粒pSML104中，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pSMLPyOD；將重組質(zhì)粒pSMLPyOD轉(zhuǎn)化E.coli?DH5α感受態(tài)細(xì)胞。