本發明涉及生物技術領域，特別是涉及獸用生物制品工程技術領域，更為具體的說是涉及無血清培養及其用途和應用這些培養基的豬瘟病毒的培養方法。本發明以MEM為基礎培養基，通過對豬睪丸細胞以及豬瘟病毒的生長、增殖特征研究，利用在基礎培養基內添加不同成分，分別得到一系列的豬睪丸細胞無血清培養基、以及不同生長階段的豬瘟病毒增殖無血清培養基，從而既避免了BVDV及其抗體可能產生的污染風險，同時可以實現ST細胞貼壁生長，且生長迅速、細胞面完整，個體飽滿，可以長期傳代培養。

1.適用于微載體懸浮培養的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為7.0
~7.5的水溶液，其組分如下：MEM基礎培養基9.8g/L；
丙酮酸鈉50～200mg/L；
大豆蛋白水解物0.5～2g/L；
膽固醇2～6mg/L；
堿性成纖維細胞生長因子15～50mg/L；
抑制素B 15～50mg/L；
胰島素15～50mg/L；
L-丙氨酸10～30mg/L；
L-纈氨酸100～200mg/L；
L-亮氨酸10～80mg/L；
L-異亮氨酸25～100mg/L；
L-甲硫氨酸100～200mg/L；
L-脯氨酸100～200mg/L；
L-苯丙氨酸100～200mg/L；
L-色氨酸15～100mg/L；
L-甘氨酸0～30mg/L；
L-絲氨酸10～100mg/L；
L-蘇氨酸10～100mg/L；
L-半胱氨酸10～100mg/L；
L-天冬酰胺10～100mg/L；
L-谷氨酰胺200～300mg/L；
L-酪氨酸10～100mg/L；
L-天冬氨酸10～30mg/L；
L-谷氨酸10～100mg/L；
L-賴氨酸10～100mg/L；
L-精氨酸10～100mg/L；
L-組氨酸10～100mg/L；
羥脯氨酸10～100mg/L；
豆蔻酸0.05～0.3mg/L；
棕櫚酸0.05～0.3mg/L；
棕櫚油酸0.05～0.3mg/L；
硬脂酸0.05～0.3mg/L；
精胺0.1～0.3ml/L；
亞精胺0.1～0.3ml/L；
還原型谷胱甘肽1～3mg/L；
乙醇胺1～3ml/L；
β-巰基乙醇0.5～2ml/L；
甘油0.5～2g/L；
生物素0.01～0.1mg/L；
吡哆醇1～3mg/L；
抗壞血酸0.5～3mg/L；
維生素B-12 0.5～2mg/L；
次黃嘌呤3～20mg/L；
胸苷0.01～0.1mg/L；
NaHCO₃ 1～1.5g/L；
FeSO₄7H₂O 5～20mg/L；
ZnSO₄ 15～40mg/L；
Na₂SeO₃ 0.1～0.5mg/L；
檸檬酸鐵 2～20mg/L。
2.根據權利要求1所述的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為7.2的
水溶液。
3.權利要求1所述的無血清培養基在豬睪丸細胞體外培養和擴增中的應用。
4.適用于微載體懸浮培養的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為6.2
~6.8的水溶液，其組分如下：MEM基礎培養基9.8g/L；
丙酮酸鈉100～200mg/L；
大豆蛋白水解物1～2g/L；
膽固醇2～6mg/L；
堿性成纖維細胞生長因子0.1～1mg/L；
抑制素B 0.2～1mg/L；
胰島素 5～20mg/L；
L-丙氨酸10～100mg/L；
L-纈氨酸20～50mg/L；
L-甲硫氨酸10～30mg/L；
L-脯氨酸100～200mg/L；
L-色氨酸150～300mg/L；
L-甘氨酸 20～80mg/L；
L-絲氨酸25～100mg/L；
L-半胱氨酸50～200mg/L；
L-天冬酰胺50～200mg/L；
L-谷氨酰胺50～200mg/L；
L-天冬氨酸20～80mg/L；
L-谷氨酸50～200mg/L；
羥脯氨酸10～60mg/L；
豆蔻酸0.1～0.3mg/L；
棕櫚酸0.1～0.3mg/L；
棕櫚油酸0.1～0.3mg/L；
硬脂酸0.1～0.3mg/L；
精胺0.1～0.3ml/L；
亞精胺0.1～0.3ml/L；
還原型谷胱甘肽3～15mg/L；
乙醇胺1.5～3ml/L；
β-巰基乙醇1～3ml/L；
甘油0.5～2.5g/L；
二甲基亞砜 1～4ml/L；
羥乙基哌嗪乙磺酸 2500～5000mg/L；
生物素0.01～0.1mg/L；
吡哆醇1～3mg/L；
抗壞血酸3～7mg/L；
維生素B-12 0.5～2mg/L；
次黃嘌呤3～10mg/L；
胸苷 0.01～0.11mg/L；
FeSO₄7H₂O 5～20mg/L；
ZnSO₄ 10～30mg/L；
Na₂SeO₃ 0.1～1mg/L；
檸檬酸鐵2～20mg/L。
5.根據權利要求4所述的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為6.6的
水溶液。
6.權利要求4所述的無血清培養基在豬瘟病毒增殖前期中的應用。
7.適用于微載體懸浮培養的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為7.0
~7.2的水溶液，其組分如下：MEM基礎培養基9.8g/L；
丙酮酸鈉10～50mg/L；
大豆蛋白水解物0.1～0.5g/L；
膽固醇0.01～0.5mg/L；
胰島素0.01～1mg/L；
豆蔻酸0.01～0.1mg/L；
棕櫚酸0.01～0.1mg/L；
棕櫚油酸0.01～0.1mg/L；
硬脂酸0.01～0.1mg/L；
精胺0.1～0.3ml/L；
亞精胺0.1～0.3ml/L；
還原型谷胱甘肽0.1～1mg/L；
乙醇胺0.1～1ml/L；
β-巰基乙醇0.5～2ml/L；
甲基-β-環糊精500～1500mg/L；
γ-環糊精500～1500mg/L；
羥乙基哌嗪乙磺酸2500～5000mg/L；
生物素0.01～0.1mg/L；
吡哆醇0.1～0.5mg/L；
抗壞血酸1～5mg/L；
維生素B-12 0.1～1mg/L；
次黃嘌呤0.1～2mg/L；
胸苷0.01～0.1mg/L；
FeSO₄7H₂O 1～10mg/L；
ZnSO₄ 1～5mg/L；
Na₂SeO₃ 0.1～1mg/L；
檸檬酸鐵2～20mg/L。
8.根據權利要求7所述的無血清培養基，其特征在于：所述無血清培養基為pH為7.0的
水溶液。
9.權利要求7所述的無血清培養基在豬瘟病毒增殖后期中的應用。
10.一種豬瘟病毒的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：將豬瘟病毒接種于權利要
求5所述的無血清培養基中，控制DO值為30%，pH值為6.6，攪拌轉速為75rpm，溫度為37℃，接
種病毒后每三天進行收毒換液操作，完成3~5批次收毒后，轉用權利要求7所述的無血清培
養基進行培養增殖，控制DO值為30%，pH值為7.0，攪拌轉速為55rpm，溫度為32℃，接種病毒
后每四天進行收毒換液操作，完成2批次收毒后，即完成豬瘟病毒的培養、收集。