本發明公開了一種制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養細胞系的方法及其專用培養基。本發明的液體培養基是在MS基本培養液中添加2，4-D、KT和碳源得到的液體培養基；液體培養基中2，4-D的終濃度是1-3mg/L，KT的終濃度是0.2-1mg/L。本發明的制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養細胞系的方法，是將紫背天葵胚性愈傷組織置于本發明的液體培養基中培養得到的懸浮培養細胞系。本發明中愈傷組織的誘導率可達到100％。本發明可有效地制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養細胞系，為建立以紫背天葵為原料生物反應器提供了可靠基礎。

1.一種用于紫背天葵懸浮培養細胞系的液體培養基，是在MS基本培養液中添加
2，4-D、KT和碳源得到的液體培養基；所述液體培養基中2，4-D的終濃度是1.5-2.5
mg/L，KT的終濃度是0.4-0.6mg/L；所述MS基本培養液的溶劑是水、溶質是：1650
mg·L^-1?NH₄NO₃，1900mg·L^-1?KNO₃，170mg·L^-1?KH₂PO₄，370mg·L^-1?MgSO₄.7H₂O，
330mg·L^-1?CaCl₂，22.3mg·L^-1?MnSO₄.4H₂O，8.6mg·L^-1?ZnSO₄.7H₂O，6.2mg·L^-1
H₃BO₃，0.83mg·L^-1?KI，0.25mg·L^-1?Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg·L^-1?CuSO₄.5H₂O，0.025
mg·L^-1?CoCl₂.6H₂O，27.8mg·L^-1?FeSO₄.4H₂O，37.3mg·L^-1?Na₂EDTA，2.0mg·L^-1甘
氨酸，0.4mg·L^-1鹽酸硫胺素，0.5mg·L^-1鹽酸吡哆素，0.5mg·L^-1煙酸，100mg·L^-1
肌醇。
2.根據權利要求1所述的液體培養基，其特征在于：所述液體培養基中2，4-D的
終濃度是2mg/L，KT的終濃度是0.5mg/L。
3.根據權利要求1或2所述的液體培養基，其特征在于：所述碳源為葡萄糖、
麥芽糖或蔗糖，所述蔗糖的終濃度是25-35g/L。
4.一種制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養細胞系的方法，是將紫背天葵胚性愈傷
組織置于權利要求1-3中任一所述的液體培養基中培養，得到懸浮培養細胞系。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述紫背天葵胚性愈傷組織是將
紫背天葵葉片置于愈傷組織誘導培養基上誘導培養得到的。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導培養基是在MS
基本培養液中添加2，4-D、KT、碳源和凝膠劑得到的固體培養基；其中2，4-D的終濃
度是1-3mg/L，KT的終濃度是0.2-1mg/L；
所述MS基本培養液的溶劑是水、溶質是：1650mg·L^-1?NH₄NO₃，1900mg·L^-1?KNO₃，
170mg·L^-1?KH₂PO₄，370mg·L^-1?MgSO₄.7H₂O，330mg·L^-1?CaCl₂，22.3mg·L^-1
MnSO₄.4H₂O，8.6mg·L^-1?ZnSO₄.7H₂O，6.2mg·L^-1?H₃BO₃，0.83mg·L^-1?KI，0.25mg·L^-1
Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg·L^-1?CuSO₄.5H₂O，0.025mg·L^-1?CoCl₂.6H₂O，27.8mg·L^-1
FeSO₄.4H₂O，37.3mg·L^-1?Na₂EDTA，2.0mg·L^-1甘氨酸，0.4mg·L^-1鹽酸硫胺素，0.5
mg·L^-1鹽酸吡哆素，0.5mg·L^-1煙酸，100mg·L^-1肌醇。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導培養基中2，4-D
的終濃度是2mg/L，KT的終濃度是0.5mg/L。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述凝膠劑是瓊脂、卡拉膠
或Gelrite，所述瓊脂的終濃度是7-9g/L；
所述碳源為葡萄糖、麥芽糖或蔗糖，所述蔗糖的終濃度是20-40g/L。
9.如權利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述誘導培養的條件是：
溫度為26℃，光照強度為2500lux，光照時間為16小時/天。