1.通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法,包括以下步驟:
1)雜交授粉:以栽培草莓品種和野生草莓品種為雜交親本進行雜交授粉;
2)果實消毒:將授粉后5~35天其種子未完全發育的果實取下,于4℃~7℃存放3~4小
時,取大小為1~3厘米的果實,先用70%的酒精表面消毒10~30秒,再用0.1wt%的升汞溶
液滅菌1~3分鐘,之后用無菌水清洗3~5遍,吸干果實表面水分;
3)未成熟胚剝離:在無菌條件下,將滅菌的果實取下種子剝離其幼胚,立即接種于誘導
培養基中離體培養,先暗培養7天,再進行光照培養,誘導培養21~28天后獲得膨大的胚;
光照培養條件為:光照時間10小時/天,光照強度2000~3000Lx,培養溫度24±1℃;
誘導培養基:1/2MS基本培養基,蔗糖30~50g/L,瓊脂6~8g/L,吲哚丁酸IBA0.3~
0.5mg/L,pH5.5~5.8;
4)胚萌發培養:將膨大的胚剝除胚乳后置于胚萌發培養基中進行挽救培養,培養30~
35天后幼胚萌發,光照培養條件同步驟3);
胚萌發培養基:1/2MS基本培養基,蔗糖30~50g/L,瓊脂6~8g/L,萘乙酸NAA0.2~
0.5mg/L,6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2~1.5mg/L,pH5.5~5.8;
5)增殖培養:將萌發的幼胚接種至增殖培養基中,光照培養條件和培養基組成與步驟
4)相同,每10~15天繼代增殖1次,獲得芽苗;
6)生根培養:將經過1~4次繼代增殖培養的芽苗從芽叢中切下,轉到生根培養基中促
使其生根,生根培養45~60天,得到生根的草莓胚苗,培養溫度24±1℃;
生根培養基:1/2MS基本培養基,蔗糖30~50g/L,瓊脂6~8g/L,吲哚丁酸IBA0.2~
0.5mg/L,6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02~0.05mg/L,水解酪蛋白LH0.2~0.4g/L,腺嘌呤Ad4~
6mg/L,pH5.5~5.8;
7)煉苗移栽:開瓶后在瓶底加水,煉苗3~4天,然后將生根苗從培養瓶中取出,清水洗
凈根系附帶的培養基,然后移栽在栽培基質中遮光處理2~3天,在溫室中保持相對濕度
75%~85%進行煉苗,培養20~30天即可移入大田種植。
2.根據權利要求1所述的通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法,其特征在于,步
驟7)所述的煉苗移栽過程為:將生根后的草莓胚苗,移栽前將瓶蓋打開一條縫,注入10~15
毫升無菌水進行自然馴化2~3天,接著完全揭開瓶蓋并添加10~15毫升蒸餾水鍛煉1天,將
生根苗從培養瓶中取出,清水洗凈根系附帶的培養基,然后移栽在滅菌的栽培基質中遮光
遮蔭處理2~3天,在溫室中保持相對濕度75%~85%進行煉苗,培養20~30天即可移入大
田種植。
3.根據權利要求1或2所述的通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法,其特征在
于,所述的栽培草莓品種為久香、甜查理或豐香,野生草莓品種為野生黃毛草莓。
4.用于離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的培養基,其包括,誘導培養基、胚萌發培養基
和生根培養基,其特征在于,
所述的誘導培養基,其由以下組分組成:1/2MS基本培養基,蔗糖30~50g/L,瓊脂6~
8g/L,吲哚丁酸IBA0.3~0.5mg/L;
所述的胚萌發培養基,其由以下組分組成:1/2MS基本培養基,蔗糖30g~50g/L,瓊脂6g
~8g/L,萘乙酸NAA0.2~0.5mg/L,6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2~1.5mg/L;
所述的生根培養基,其由以下組分組成:1/2MS基本培養基,蔗糖30g~50g/L,瓊脂6g~
8g/L,吲哚丁酸IBA0.2~0.5mg/L,6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02~0.05mg/L,水解酪蛋白LH0.2
~0.4g/L,腺嘌呤Ad4~6mg/L。
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