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一種提高靈芝菌絲體中總黃酮產量的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-28
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210110969.5 
  • 技術(專利)名稱 一種提高靈芝菌絲體中總黃酮產量的方法 
  • 項目單位 山東省農業科學院農業資源與環境研究所
  • 發明人 姚強,宮志遠,單洪濤,韓建東,王琦,高能,孫濤,萬魯長,任鵬飛,李瑾,任海霞 
  • 行業類別 中藥材獲取-植物藥材種植
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 孫穎
  • 發布時間 2022-01-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種利用擴張蛋白提高靈芝菌絲體中總黃酮產量的方法,包括如下步驟:(1)將靈芝菌種接種到PD液體發酵培養基中,進行活化培養,得種子液;(2)將種子液接種于液體發酵培養基中,液體發酵培養3~5天,然后加入擴張蛋白溶液,然后繼續培養5~7天,分離,得到靈芝菌絲體;(3)從靈芝菌絲體中提取黃酮類成分,得到總黃酮。本發明將植物擴張蛋白用于靈芝黃酮類成分的液體發酵生產,且優化了發酵工藝和提取方法,大幅度提高靈芝中總黃酮的產量,使每升發酵液產量達到760.1mg,具有很好的工業化應用前景。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種提高靈芝菌絲體中總黃酮產量的方法,其特征在于,包括如下步驟:(1)將靈芝菌種接種到PD液體發酵培養基中,進行活化培養,得種子液;(2)將步驟(1)制得種子液按5~10?%體積比接種于液體發酵培養基中,在溫度25~30?℃的條件下,液體發酵培養3~5天,然后加入擴張蛋白溶液,使擴張蛋白的濃度為0.5~2.0?mg/mL,然后繼續培養5~7天,分離,得到靈芝菌絲體;(3)從步驟(2)制得的靈芝菌絲體中提取黃酮類成分,得到總黃酮;所述步驟(2)中的液體發酵培養基,每升組分如下:乳糖20?g,蔗糖20?g,黃豆粉25?g,蛋白胨2?g,酵母浸膏1?g,MgSO4·7H2O?0.5?g,?KH2PO4?0.5?g,水定容至1000?mL,pH?6.0;所述步驟(2)中的擴張蛋白溶液制備方法如下:將大豆或黃瓜種子經0.05~0.15?wt%?HgCl2消毒4~6?min,流水沖洗5~7?h,然后,25~28?℃暗培養4~6天;剪取幼苗下胚軸頂端3~4?cm,置-20?℃預冷0.5?h,加預冷至4?℃的勻漿緩沖液,勻漿后,用孔徑70?μm的尼龍網過濾,濾渣經勻漿緩沖液洗滌,然后將濾渣加入勻漿緩沖液中,室溫靜置1~3?h,得靜置液;向靜置液中加入提取液,4?℃下提取44~50?h,過濾,按0.3~0.5?g/mL的添加量向濾液中緩慢添加(NH42SO4,添加(NH42SO4過程中不斷攪拌,防止(NH42SO4局部過飽和,然后靜置45~50?h,?4?℃條件下25000?g離心5~10?min,沉淀用酸性緩沖液復溶,4?℃下分子量3000?Da的透析袋透析,透析液經20000?g離心10?min,取上清液即為制備的擴張蛋白溶液;上述擴張蛋白溶液制備方法中,所述勻漿緩沖液組分為:25?mmol/L?4-羥乙基哌嗪乙磺酸,1.5?mmol/L?Na2S2O5,2?mmol/L?EDTA,0.1?wt%?Triton?X-100,pH?7.0;所述提取液組分為:15?mmol/L?4-羥乙基哌嗪乙磺酸,1.0?mmol/L?乙二胺四乙酸,1.5?mmol/L?Na2S2O5,0.5?mol/L?NaCl,pH?6.0;所述酸性緩沖液配制是:將2.05?g醋酸鈉溶于水中,用冰醋酸調節pH至4.0,水定容至1?L。2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(1)中的活化培養條件為:搖床轉速100~180?r/min,溫度25~30℃,暗培養活化3~5天。3.?如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(2)中,擴張蛋白的濃度為0.75~1.75mg/mL。4.?如權利要求3所述的方法,其特征在于,所述步驟(2)中,擴張蛋白的濃度為1.5?mg/mL。5.?如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中所述的分離方法為:4?℃?15000?r/min條件下離心分離10?min。6.?如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中靈芝菌絲體中提取黃酮類成分的方法按如下步驟如下:將步驟(2)制得的靈芝菌絲體65?℃烘干,研成粉末,加入70~80?%乙醇,60~70?℃、40?kHz功率200?W條件下,超聲提取3~5?h,過濾,取濾液,濾渣重復上述超聲提取、過濾步驟2~3次,合并濾液,即得黃酮類成分。
    展開

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