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霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法及使用的營(yíng)養(yǎng)液的配方

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-02
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201510616437.2 
  • 技術(shù)(專利)名稱 霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法及使用的營(yíng)養(yǎng)液的配方 
  • 項(xiàng)目單位 戴亞峰
  • 發(fā)明人 戴亞峰 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-植物藥材種植
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 錢貝妮
  • 發(fā)布時(shí)間 2022-01-02  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    一種霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,包括下述步驟:固體培養(yǎng)基的制備,其中固體營(yíng)養(yǎng)基的配方包括:大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、激素以及添加物;液體營(yíng)養(yǎng)液的制備:液體營(yíng)養(yǎng)液的配方按照固體培養(yǎng)基的配方,不添加激素、瓊脂、矮壯素和香蕉蘋果提取液;霍山石斛果莢的選擇和消毒;霍山石斛種子懸浮液的制備;無菌播種;種苗培養(yǎng);出苗。采用上述方法進(jìn)行霍山石斛的培育的優(yōu)點(diǎn)在于:縮短了霍山石斛的培養(yǎng)周期,6個(gè)月可以出苗,即在種子成熟的10月份播種,第二年的4月份就可以出苗,剛好趕在栽苗期;降低了50%的霍山石斛組培育苗的生產(chǎn)成本,減少了種植投入;增加栽培的成活率和發(fā)芽率。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于:包括下述步驟:
    步驟一:固體培養(yǎng)基的制備,其中固體營(yíng)養(yǎng)基的配方包括:
    以下組成及配比的大量元素:
    硝酸鉀KNO3:300~500mg/L;
    硫酸銨(NH4)2SO4:400~600mg/L;
    磷酸二氫鉀KH2PO4:300~500mg/L;
    硫酸鎂MgSO4.7H2O:200~300mg/L;
    硝酸鈣Ca(NO3)2:400~500mg/L;
    以下組成及配比的微量元素:
    碘化鉀KI:0.65~0.95mg/L;
    硼酸H3BO3:5.3~8.9mg/L;
    硫酸錳MnSO4.4H2O:19~25mg/L;
    硫酸鋅ZnSO4.7H2O:6.5~9.8mg/L;
    鉬酸鈉Na2MoO4.2H2O:0.10~0.45mg/L;
    硫酸銅CuSO4.5H2O:0.010~0.035mg/L;
    氯化鈷CoCl2:0.010~0.035mg/L;
    以下組成及配比的鐵鹽:
    乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA:25.5~40.5mg/L;
    硫酸亞鐵FeSO4.7H2O:22.5~30.5mg/L;
    以下組成及配比的有機(jī)成分:
    肌醇C6H12O6:90~110mg/L;
    甘氨酸C2H5NO2:1~3mg/L;
    鹽酸硫胺素VB1:0.05~0.15mg/L;
    鹽酸吡哆醇VB6:0.4~0.6mg/L;
    煙酸VB5或VPP:0.4~0.6mg/L;
    以下組成及配比的激素:
    萘乙酸NAA:0.6~0.9mg/L;
    6-芐氨基嘌呤6-BA:0.4~0.6mg/L;
    以下組成及配比的添加物:
    蔗糖:25~35g/L;
    瓊脂:3.5~5.5mg/L;
    花寶1號(hào):1.5~2.5mg/L;
    香蕉蘋果混合提取液2~4:1~2:120~200g/L;
    所述固體培養(yǎng)基的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,加入上述配方的瓊脂,形成瓊脂初混
    液,將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液,該添加物浸出液
    與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液,在該瓊膠液內(nèi)按上述組分和配方加入大量元素、微量
    元素、鐵鹽、有機(jī)成分、激素,然后攪拌均勻,形成培養(yǎng)基初液,調(diào)節(jié)ph值至5.6-6.0,溫度維
    持在50℃到70℃之間進(jìn)行分裝,分裝后100℃~150℃滅菌10min~30min備用;
    步驟二:液體營(yíng)養(yǎng)液的制備:液體營(yíng)養(yǎng)液的配方按照固體培養(yǎng)基的配方,不添加激素、
    瓊脂、花寶1號(hào)和香蕉蘋果提取液,所述液體營(yíng)養(yǎng)液的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,按照液
    體營(yíng)養(yǎng)液的配方加入各組分,混合定容后,調(diào)節(jié)ph值至5.6-6.0,溫度維持在50℃到70℃之
    間進(jìn)行分裝,分裝后100℃~150℃滅菌10min~30min備用;
    步驟三:霍山石斛果莢的選擇和消毒:選擇當(dāng)年成熟飽滿的霍山石斛碩果,表面無病
    斑、蟲蛀和開裂,將采收的霍山石斛碩果進(jìn)行清理,去除碩果表面枯萎的殘花,并用清水反
    復(fù)沖洗,然后放入75%的酒精中至淹沒為止,浸泡20min~50min,然后放在無菌的接種盤中
    在無菌操作臺(tái)上晾干,備用;
    步驟四:霍山石斛種子懸浮液的制備:無菌室超凈工作臺(tái)面上,用手術(shù)刀在碩果的一端
    切開一個(gè)小口子,用鑷子夾住果柄,將切口對(duì)準(zhǔn)瓶口,用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
    子,將種子均勻的散落營(yíng)養(yǎng)液中,并在無菌的環(huán)境下用磁力攪拌器將懸浮液攪拌均勻,并用
    懸浮計(jì)數(shù)法在顯微鏡下用計(jì)數(shù)板檢測(cè)種子在懸浮液的密度,要求達(dá)到80~120粒/ml的密
    度;
    步驟五:無菌播種:在無菌操作臺(tái)上,用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml,放入
    固體培養(yǎng)基中,蓋好瓶蓋緩慢晃動(dòng),直至瓶?jī)?nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止,放入
    培養(yǎng)框中,送至培養(yǎng)室培養(yǎng);
    步驟六:種苗培養(yǎng),剛開始10天是種子萌發(fā)階段,采用暗培養(yǎng),無光照,溫度控制在24℃
    ~27℃,10天-70天,為發(fā)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間7~9小時(shí),光照強(qiáng)度
    1500lux-2000lux,溫度控制在25℃~28℃,70天~120天,為發(fā)生根階段,這一時(shí)間段內(nèi),保
    證光照時(shí)間9~12小時(shí),光照強(qiáng)度1800lux-2100lux,溫度控制在24℃~27℃,120天~180
    天,為壯苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間9~12小時(shí),光照強(qiáng)度2500lux-3000lux,溫度
    控制在24℃~27℃;在培養(yǎng)過程中,若發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)基被種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續(xù)
    生長(zhǎng)需要時(shí),用無菌移液槍在無菌操作臺(tái)上將滅菌后的液體營(yíng)養(yǎng)液加至培養(yǎng)瓶中,供應(yīng)種
    苗繼續(xù)生長(zhǎng);
    步驟七:出苗。
    2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于:步驟七的出
    苗標(biāo)準(zhǔn)為:用于栽培的霍山石斛商品苗為非污染、無爛莖、爛根;葉片2片以上,正常展開,葉
    色嫩綠或翠綠,根1條以上且單位瓶?jī)?nèi)的合格苗占總苗量的95%以上。
    3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于:所述步驟一
    至步驟六具體為:
    步驟一:固體培養(yǎng)基的制備,其中固體營(yíng)養(yǎng)基的配方包括:
    以下組成及配比的大量元素:
    硝酸鉀KNO3:400mg/L;
    硫酸銨(NH4)2SO4:500mg/L;
    磷酸二氫鉀(KH2PO4):400mg/L;
    硫酸鎂MgSO4.7H2O:250mg/L;
    硝酸鈣Ca(NO3)2:450mg/L;
    以下組成及配比的微量元素:
    碘化鉀KI:0.83mg/L;
    硼酸H3BO3:6.2mg/L;
    硫酸錳MnSO4.4H2O:22.3mg/L;
    硫酸鋅ZnSO4.7H2O:8.6mg/L;
    鉬酸鈉Na2MoO4.2H2O:0.25mg/L;
    硫酸銅CuSO4.5H2O:0.025mg/L;
    氯化鈷CoCl2:0.025mg/L;
    以下組成及配比的鐵鹽:
    乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA:37.3mg/L;
    硫酸亞鐵FeSO4.7H2O:27.8mg/L;
    以下組成及配比的有機(jī)成分:
    肌醇C6H12O6:100mg/L;
    甘氨酸C2H5NO2:2mg/L;
    鹽酸硫胺素VB1:0.1mg/L;
    鹽酸吡哆醇VB6:0.5mg/L;
    煙酸VB5或VPP:0.5mg/L;
    以下組成及配比的激素:
    萘乙酸NAA:0.8mg/L;
    6-芐氨基嘌呤6-BA:0.5mg/L;
    以下組成及配比的添加物:
    蔗糖:30g/L;
    瓊脂:4.5mg/L;
    花寶1號(hào):2.0mg/L;
    香蕉蘋果混合提取液3:1:150g/L;
    所述固體培養(yǎng)基的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,加入上述配方的瓊脂,形成瓊脂初混
    液,將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液,該添加物浸出液
    與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液,在該瓊膠液內(nèi)按上述組分和配方加入大量元素、微量
    元素、鐵鹽、有機(jī)成分、激素,然后攪拌均勻,形成培養(yǎng)基初液,調(diào)節(jié)ph值至5.4,溫度維持在
    60℃按照實(shí)際操作需要進(jìn)行分裝,分裝后121℃滅菌20min備用;
    步驟二:液體營(yíng)養(yǎng)液的制備:液體營(yíng)養(yǎng)液的配方按照固體培養(yǎng)基的配方,不添加激素、
    瓊脂、花寶1號(hào)和香蕉蘋果提取液,所述液體營(yíng)養(yǎng)液的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,按照液
    體營(yíng)養(yǎng)液的配方加入各組分,混合定容后,調(diào)節(jié)ph值至5.4,溫度維持在60℃按照實(shí)際操作
    需要進(jìn)行分裝,分裝后121℃滅菌20min備用;
    步驟三:霍山石斛果莢的選擇和消毒:選擇當(dāng)年成熟保暖的霍山石斛果實(shí),表面無病
    斑、蟲斑,將采收的霍山石斛果莢進(jìn)行手工清理,去除碩果表面枯萎的殘花,并用清水反復(fù)
    沖洗,然后放入75%的酒精中至淹沒為止,浸泡30min,然后放在無菌的接種盤中在無菌操
    作臺(tái)上晾干,備用;
    步驟四:霍山石斛種子懸浮液的制備:無菌室超凈工作臺(tái)面上,用手術(shù)刀在果莢的尾部
    切開一個(gè)小口子,用鑷子夾住果柄,將切口對(duì)準(zhǔn)瓶口,用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
    子,將種子均勻的散落營(yíng)養(yǎng)液中,并在無菌的環(huán)境下用磁力攪拌機(jī)懸浮液攪拌均勻,并用懸
    浮計(jì)數(shù)法在顯微鏡下用計(jì)數(shù)板檢測(cè)種子在懸浮液的密度,達(dá)到100粒/ml的密度;
    步驟五:無菌播種:在無菌操作臺(tái)上,用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml,放入
    固體培養(yǎng)基中,蓋好瓶蓋緩慢晃動(dòng),直至瓶?jī)?nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止,放入
    培養(yǎng)框中,送至培養(yǎng)室培養(yǎng);
    步驟六:種苗培養(yǎng),剛開始10天是種子萌發(fā)階段,采用暗培養(yǎng),無光照,溫度控制在25℃
    ±2℃,10天-70天,為發(fā)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間8小時(shí),光照強(qiáng)度1500lux-
    2000lux,溫度控制在27℃±2℃,70天-120天,為發(fā)側(cè)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間
    10小時(shí),光照強(qiáng)度2000lux,溫度控制在25℃±2℃,120天-180天,為壯苗階段,這一時(shí)間段
    內(nèi),保證光照時(shí)間10小時(shí),光照強(qiáng)度2500lux-3000lux,溫度控制在25℃±2℃,180天-200
    天,為煉苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),采用自然光,光照強(qiáng)度為8000lux以下,溫度控制在32℃以
    下,在培養(yǎng)過程中,若發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)基被種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續(xù)生長(zhǎng)需要時(shí),用無
    菌移液槍在無菌操作臺(tái)上將滅菌后的液體營(yíng)養(yǎng)液加至培養(yǎng)瓶中,供應(yīng)種苗繼續(xù)生長(zhǎng)。
    4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于:所述步驟一
    至步驟六具體為:
    步驟一:固體培養(yǎng)基的制備,其中固體營(yíng)養(yǎng)基的配方包括:
    以下組成及配比的大量元素:
    硝酸鉀KNO3:500mg/L;
    硫酸銨(NH4)2SO4:600mg/L;
    磷酸二氫鉀(KH2PO4):500mg/L;
    硫酸鎂MgSO4.7H2O:300mg/L;
    硝酸鈣Ca(NO3)2:500mg/L;
    以下組成及配比的微量元素:
    碘化鉀KI:0.95mg/L;
    硼酸H3BO3:8.9mg/L;
    硫酸錳MnSO4.4H2O:25mg/L;
    硫酸鋅ZnSO4.7H2O:6.5mg/L;
    鉬酸鈉Na2MoO4.2H2O:0.10mg/L;
    硫酸銅CuSO4.5H2O:0.010mg/L;
    氯化鈷CoCl2:0.035mg/L;
    以下組成及配比的鐵鹽:
    乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA:40.5mg/L;
    硫酸亞鐵FeSO4.7H2O:22.5mg/L;
    以下組成及配比的有機(jī)成分:
    肌醇C6H12O6:110mg/L;
    甘氨酸C2H5NO2:1mg/L;
    鹽酸硫胺素VB1:0.15mg/L;
    鹽酸吡哆醇VB6:0.6mg/L;
    煙酸VB5或VPP:0.6mg/L;
    以下組成及配比的激素:
    萘乙酸NAA:0.9mg/L;
    6-芐氨基嘌呤6-BA:0.6mg/L;
    以下組成及配比的添加物:
    蔗糖:35g/L;
    瓊脂:3.5mg/L;
    花寶1號(hào):2.5mg/L;
    香蕉蘋果混合提取液2~4:1~2:120g/L;
    所述固體培養(yǎng)基的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,加入上述配方的瓊脂,形成瓊脂初混
    液,將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液,該添加物浸出液
    與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液,在該瓊膠液內(nèi)按上述組分和配方加入大量元素、微量
    元素、鐵鹽、有機(jī)成分、激素,然后攪拌均勻,形成培養(yǎng)基初液,調(diào)節(jié)ph值至6,溫度維持在70
    ℃按照實(shí)際操作需要進(jìn)行分裝,分裝后150℃滅菌10min備用;
    步驟二:液體營(yíng)養(yǎng)液的制備:液體營(yíng)養(yǎng)液的配方按照固體培養(yǎng)基的配方,不添加激素、
    瓊脂、花寶1號(hào)和香蕉蘋果提取液,所述液體營(yíng)養(yǎng)液的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,按照液
    體營(yíng)養(yǎng)液的配方加入各組分,混合定容后,調(diào)節(jié)ph值至6,溫度維持在70℃按照實(shí)際操作需
    要進(jìn)行分裝,分裝后150℃滅菌10min備用;
    步驟三:霍山石斛果莢的選擇和消毒:選擇當(dāng)年成熟保暖的霍山石斛果實(shí),表面無病
    斑、蟲斑,將采收的霍山石斛果莢進(jìn)行手工清理,去除碩果表面枯萎的殘花,并用清水反復(fù)
    沖洗,然后放入75%的酒精中至淹沒為止,浸泡20min,然后放在無菌的接種盤中在無菌操
    作臺(tái)上晾干,備用;
    步驟四:霍山石斛種子懸浮液的制備:無菌室超凈工作臺(tái)面上,用手術(shù)刀在果莢的尾部
    切開一個(gè)小口子,用鑷子夾住果柄,將切口對(duì)準(zhǔn)瓶口,用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
    子,將種子均勻的散落營(yíng)養(yǎng)液中,并在無菌的環(huán)境下用磁力攪拌機(jī)懸浮液攪拌均勻,并用懸
    浮計(jì)數(shù)法在顯微鏡下用計(jì)數(shù)板檢測(cè)種子在懸浮液的密度,達(dá)到120粒/ml的密度;
    步驟五:無菌播種:在無菌操作臺(tái)上,用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml,放入
    固體培養(yǎng)基中,蓋好瓶蓋緩慢晃動(dòng),直至瓶?jī)?nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止,放入
    培養(yǎng)框中,送至培養(yǎng)室培養(yǎng);
    步驟六:種苗培養(yǎng),剛開始10天是種子萌發(fā)階段,采用暗培養(yǎng),無光照,溫度控制在27
    ℃,10天-70天,為發(fā)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間9小時(shí),光照強(qiáng)度1500lux,溫度控
    制在25℃,70天-120天,為發(fā)側(cè)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間9小時(shí),光照強(qiáng)度
    2100lux,溫度控制在27℃,120天-180天,為壯苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間12小
    時(shí),光照強(qiáng)度2500lux,溫度控制在27℃,180天-200天,為煉苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),采用自
    然光,光照強(qiáng)度為8000lux以下,溫度控制在32℃以下,在培養(yǎng)過程中,若發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)基被
    種苗吸收完不能夠滿足種苗繼續(xù)生長(zhǎng)需要時(shí),用無菌移液槍在無菌操作臺(tái)上將滅菌后的液
    體營(yíng)養(yǎng)液加至培養(yǎng)瓶中,供應(yīng)種苗繼續(xù)生長(zhǎng)。
    5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛組織培養(yǎng)一步成苗的方法,其特征在于:所述步驟一
    至步驟六具體為:
    步驟一:固體培養(yǎng)基的制備,其中固體營(yíng)養(yǎng)基的配方包括:
    以下組成及配比的大量元素:
    硝酸鉀KNO3:300mg/L;
    硫酸銨(NH4)2SO4:400mg/L;
    磷酸二氫鉀(KH2PO4):300mg/L;
    硫酸鎂MgSO4.7H2O:200mg/L;
    硝酸鈣Ca(NO3)2:400mg/L;
    以下組成及配比的微量元素:
    碘化鉀KI:0.65mg/L;
    硼酸H3BO3:5.3mg/L;
    硫酸錳MnSO4.4H2O:19mg/L;
    硫酸鋅ZnSO4.7H2O:9.8mg/L;
    鉬酸鈉Na2MoO4.2H2O:0.45mg/L;
    硫酸銅CuSO4.5H2O:0.035mg/L;
    氯化鈷CoCl2:0.01mg/L;
    以下組成及配比的鐵鹽:
    乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA:25.5mg/L;
    硫酸亞鐵FeSO4.7H2O:30.5mg/L;
    以下組成及配比的有機(jī)成分:
    肌醇C6H12O6:90mg/L;
    甘氨酸C2H5NO2:3mg/L;
    鹽酸硫胺素VB1:0.05mg/L;
    鹽酸吡哆醇VB6:0.4mg/L;
    煙酸VB5或VPP:0.4mg/L;
    以下組成及配比的激素:
    萘乙酸NAA:0.6mg/L;
    6-芐氨基嘌呤6-BA:0.4mg/L;
    以下組成及配比的添加物:
    蔗糖:25g/L;
    瓊脂:5.5mg/L;
    花寶1號(hào):1.5mg/L;
    香蕉蘋果混合提取液2~4:1~2:200g/L
    所述固體培養(yǎng)基的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,加入上述配方的瓊脂,形成瓊脂初混
    液,將上述組成及配比的添加物加水加熱粉碎并浸出形成添加物浸出液,該添加物浸出液
    與上述瓊脂初混液混合形成瓊膠液,在該瓊膠液內(nèi)按上述組分和配方加入大量元素、微量
    元素、鐵鹽、有機(jī)成分、激素,然后攪拌均勻,形成培養(yǎng)基初液,調(diào)節(jié)ph值至5.6,溫度維持在
    50℃按照實(shí)際操作需要進(jìn)行分裝,分裝后100℃滅菌30min備用;
    步驟二:液體營(yíng)養(yǎng)液的制備:液體營(yíng)養(yǎng)液的配方按照固體培養(yǎng)基的配方,不添加激素、
    瓊脂、花寶1號(hào)和香蕉蘋果提取液,所述液體營(yíng)養(yǎng)液的生產(chǎn)流程包括:水加熱沸騰后,按照液
    體營(yíng)養(yǎng)液的配方加入各組分,混合定容后,調(diào)節(jié)ph值至5.4,溫度維持在50℃按照實(shí)際操作
    需要進(jìn)行分裝,分裝后100℃滅菌30min備用;
    步驟三:霍山石斛果莢的選擇和消毒:選擇當(dāng)年成熟保暖的霍山石斛果實(shí),表面無病
    斑、蟲斑,將采收的霍山石斛果莢進(jìn)行手工清理,去除碩果表面枯萎的殘花,并用清水反復(fù)
    沖洗,然后放入75%的酒精中至淹沒為止,浸泡50min,然后放在無菌的接種盤中在無菌操
    作臺(tái)上晾干,備用;
    步驟四:霍山石斛種子懸浮液的制備:無菌室超凈工作臺(tái)面上,用手術(shù)刀在果莢的尾部
    切開一個(gè)小口子,用鑷子夾住果柄,將切口對(duì)準(zhǔn)瓶口,用另一只鑷子輕輕敲打夾住果柄的鑷
    子,將種子均勻的散落營(yíng)養(yǎng)液中,并在無菌的環(huán)境下用磁力攪拌機(jī)懸浮液攪拌均勻,并用懸
    浮計(jì)數(shù)法在顯微鏡下用計(jì)數(shù)板檢測(cè)種子在懸浮液的密度,達(dá)到80粒/ml的密度;
    步驟五:無菌播種:在無菌操作臺(tái)上,用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml,放入
    固體培養(yǎng)基中,蓋好瓶蓋緩慢晃動(dòng),直至瓶?jī)?nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止,放入
    培養(yǎng)框中,送至培養(yǎng)室培養(yǎng);
    步驟六:種苗培養(yǎng),剛開始10天是種子萌發(fā)階段,采用暗培養(yǎng),無光照,溫度控制在24
    ℃,10天-70天,為發(fā)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間7小時(shí),光照強(qiáng)度2000lux,溫度控
    制在28℃,70天-120天,為發(fā)側(cè)芽階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間12小時(shí),光照強(qiáng)度
    1800lux,溫度控制在24℃,120天-180天,為壯苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),保證光照時(shí)間9小時(shí),
    光照強(qiáng)度3000lux,溫度控制在24℃,180天-200天,為煉苗階段,這一時(shí)間段內(nèi),采用自然
    光,光照強(qiáng)度為8000lux以下,溫度控制在32℃以下,在培養(yǎng)過程中,若發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)基被種
    苗吸收完不能夠滿足種苗繼續(xù)生長(zhǎng)需要時(shí),用無菌移液槍在無菌操作臺(tái)上將滅菌后的液體
    營(yíng)養(yǎng)液加至培養(yǎng)瓶中,供應(yīng)種苗繼續(xù)生長(zhǎng)。
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