本發(fā)明公開了一種戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，包括：誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基中進行。本發(fā)明提供的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良戰(zhàn)骨種苗，滿足生產(chǎn)上的需要。

1.一種戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生
根培養(yǎng)，其中，以帶腋芽的莖段作為外植體，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯
苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基中進行；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基的組
成為：MS，30g·L^-1蔗糖，1.0mg·L^-16-芐基腺嘌呤，0.2mg·L^-1萘乙酸和3.5g·L^-1
瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8；所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基的組成為：MS，
30g·L^-1蔗糖，1.0g·L^-1活性炭，1.0-2.0mg·L^-16-芐基腺嘌呤，0.1-1.0mg·L^-1
萘乙酸，0.3-0.5mg·L^-1吲哚乙酸和3.5g·L^-1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8；
所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基的組成為：MS，30g·L^-1蔗糖，1.0g·L^-1活性炭，
0.5-1.5mg·L^-16-芐基腺嘌呤，0.1-2mg·L^-1的萘乙酸和3.5g·L^-1瓊脂，并調(diào)節(jié)
初始pH值為5.8；所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基的組成為：1/2MS，30g·L^-1
蔗糖，1.0g·L^-1活性炭，0.3-0.5mg·L^-1生根粉，1.0-2.0mg·L^-1萘乙酸和3.5g·L^-1
瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8；在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述增殖
培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)中的固
體培養(yǎng)基中均放入明膠海綿，所述明膠海綿為邊長0.5cm的立方體，每升所
述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述壯苗培養(yǎng)
中的固體培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基中均放置有100-120個所述
明膠海綿，當(dāng)所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、
所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基凝固時，所述
明膠海綿全部均勻浸入所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基、所述增殖培養(yǎng)中的固
體培養(yǎng)基、所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基中。
2.如權(quán)利要求1所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中，
將外植體在溫度為24-26℃，光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d
的條件下培養(yǎng)20d，誘導(dǎo)不定芽萌發(fā)，以得到無菌試管苗。
3.如權(quán)利要求1所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之
后進行所述增殖培養(yǎng)，將經(jīng)過所述誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的無菌試管苗在溫度為
24-26℃，光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，
得到大量不定芽。
4.如權(quán)利要求1所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述增殖培養(yǎng)之
后進行所述壯苗培養(yǎng)，將經(jīng)過所述增殖培養(yǎng)得到的不定芽在溫度為24-26℃，
光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到健壯
植株。
5.如權(quán)利要求1-4任一項所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述壯
苗培養(yǎng)之后進行所述生根培養(yǎng)，將經(jīng)過所述壯苗培養(yǎng)得到的健壯植株在溫度
為24-26℃，光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，
得到帶根苗。
6.如權(quán)利要求1所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之前還包
括獲得無菌外植體的步驟，其中，所述獲得無菌外植體的步驟為：
步驟一、取帶腋芽的莖段作為外植體，放置于燒杯中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.05％-0.1％的洗潔精水溶液浸泡5-10min，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷所述外
植體表面污垢，取出所述外植體后用流水沖洗15-20min，移至超凈工作臺；
步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分?jǐn)?shù)為70％-75％的酒精
中浸泡10-20秒，然后將所述外植體在含有重量份數(shù)為0.01-0.1份的表面活性
劑、0.1-1.0份的抗菌肽和70-100份的無菌水的混合溶液中浸泡10-20min，再
利用低溫等離子體處理浸泡在所述混合溶液中的外植體1-5min，取出所述外
植體后用無菌水沖洗3-5次，一次2-5min，最后用無菌吸水紙吸干所述外植
體表面水分，切成0.5-0.8cm的帶一個腋芽的莖段，得到無菌外植體。
7.如權(quán)利要求6所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，所述步驟二中所述
表面活性劑為吐溫-20、蔗糖酯和十六烷基三甲基氯化銨中的任意一種或幾
種。
8.如權(quán)利要求6所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，其中，所述步驟二中利用
所述低溫等離子體處理所述外植體的步驟為：將大氣壓低溫等離子體裝置的
噴嘴沒入所述混合溶液液面以下，在所述大氣壓低溫等離子體裝置內(nèi)通入氧
氣和氦氣質(zhì)量比為1:20的混合氣體，然后打開放電裝置，放電處理1-5min
讓所述大氣壓低溫等離子體裝置產(chǎn)生的低溫等離子體與水接觸，對所述混合
溶液中的外植體進行殺菌處理。
9.如權(quán)利要求1所述的戰(zhàn)骨的組織培養(yǎng)方法，在所述生根培養(yǎng)之后還包
括煉苗移栽的步驟，其中，所述煉苗移栽的步驟為：
步驟(1)、在溫度23-25℃下，向所述生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中加入水使
所述生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基全部位于水中，并繼續(xù)培養(yǎng)3-5d；以及，
步驟(2)、洗凈所述步驟(1)中處理后的試管苗的根部培養(yǎng)基，移栽到
泥炭土與細河沙質(zhì)量比為3:1的混合基質(zhì)中培養(yǎng)30-40d，再移栽至大田。