本發明公開了一種離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，包括花粉密度測定、離心液配制、授粉柱頭固定、差速離心洗脫、熒光顯微鏡觀察、粘附力計算等步驟。首先用密度梯度離心法測定花粉密度，其次配置質量百分比為70%的蔗糖溶液作為離心液，然后將待測的授粉柱頭固定在離心管底部，在4~30℃下，將經質量百分比0.01~1%的水溶性苯丙胺藍染色的授粉柱頭，在離心機中洗脫5~20min，顯微鏡下觀察待測授粉柱頭上花粉被洗脫時的離心加速度，根據下列公式計算花粉與柱頭間的粘附力：本發明可用于各種花粉與柱頭粘附力的測量，測量精度高，重復性好，簡便易行。

1.一種離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，包括花粉密度測定、離心液配制、授粉柱頭固定、差速離心洗脫及熒光顯微鏡觀察、粘附力計算工序，具體有以下步驟：A、花粉密度測定：用密度梯度離心法測定花粉密度，包括蔗糖濃度梯度溶液配制、花粉樣品處理、花粉樣品鋪放、密度梯度離心液配制、離心沉降、繪制吸光度標準曲線、測定吸光度及花粉密度計算，具體包括：a、蔗糖濃度梯度溶液配制：將蔗糖溶于水中，配制成質量百分比分別為20~70%的溶液；b、花粉樣品處理：將蔗糖溶于水中，配置成質量百分比為10%的溶液，稱取0.001~0.01g待測花粉混合在100~1000μl?10%蔗糖溶液中；c、花粉樣品鋪放：將含有花粉樣品的10%蔗糖溶液注入離心管底部；d、密度梯度離心液配制：采用層鋪法將質量百分比20~70%的蔗糖溶液依次注入，已含有待測花粉樣品的10%蔗糖溶液的離心管底部，配置成密度梯度離心液；e、離心沉降：在離心機中20℃下以4000~10000rpm速度，對含待測花粉樣品的密度梯度離心液離心5~15min，待花粉達到沉降平衡后靜置；f、繪制吸光度標準曲線：選取花粉懸浮所在層相應濃度的蔗糖溶液，繪制待測花粉在該相應濃度的蔗糖溶液中的吸光度標準曲線；g、測定吸光度值：取花粉沉降平衡后的密度梯度離心液，采用分光光度計在290?nm波長下，測定待測花粉懸浮層蔗糖溶液的吸光度值，利用標準曲線換算成該層濃度梯度下花粉的濃度值；h：花粉密度計算：花粉的密度按照下列公式計算：?????????????????????????????????????????????????其中：ρ——花粉的密度；ODn——第n層蔗糖梯度溶液中花粉濃度值；OD——所有含花粉的各蔗糖梯度溶液中花粉濃度值總和；ρn——第n梯度蔗糖溶液密度；B、離心液配制：將蔗糖溶于水中，配制成質量百分比70%的溶液作為離心液，置于微量離心管中備用；C、授粉柱頭固定：將待測柱頭切下10~15mm長的一段，授粉后，將授粉柱頭固定在盛有2/3體積離心液的微量離心管底部，靜置3~5min；D、差速離心洗脫及熒光顯微鏡觀察：在4~30℃下，將經質量百分比0.01~1%的水溶性苯丙胺藍染色的授粉柱頭，在離心機中以不同的加速度g_加速度，離心處理5~20min，用紫外熒光顯微鏡觀察柱頭表面花粉粒的附著情況，記錄柱頭表面觀察不到花粉粒狀態下的加速度g_加速度；E、粘附力計算：花粉與柱頭間的粘附力，按照下列公式計算：其中：d_蔗糖——測定溫度下蔗糖溶液的密度g/ml；d_花粉——花粉的密度g/ml；V_花粉——花粉的體積ml；g_加速度——花粉被離心洗脫時的重力加速度m/s²。2.如權利要求1所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：步驟C所述固定方法為利用重金屬絲纏繞在包裹有薄膜的授粉柱頭上，使之能夠沉入到盛有高密度蔗糖溶液的離心管的底部。3.如權利要求2所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：所述重金屬絲的密度大于離心液的密度，直徑50~200μm，纏繞長度10~50cm。4.如權利要求1所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：步驟B、C所述離心管根據離心機轉子要求選用1.5ml~50ml的離心管。5.如權利要求1所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：步驟D所述的水溶性苯丙胺藍的質量百分比0.01%~0.1%。6.如權利要求1所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：步驟D所述的離心機為Microfuge?22R臺式微量冷凍離心機。7.如權利要求1所述離心法測定花粉與柱頭粘附力的方法，其特征在于：步驟D所述的顯微鏡為Carl?Zeiss??Axioimager?A1紫外熒光顯微鏡。