本發明公開了一種基于金納米粒子?多肽復合物團聚效應的蛋白激酶及其抑制劑檢測方法，屬于光學傳感技術領域。它先將蛋白激酶對應的底物多肽通過半胱氨酸的巰基連接到金納米粒子表面，制備金納米粒子?多肽復合物；在蛋白激酶和三磷酸腺苷的作用下，多肽的絲氨酸位點發生磷酸化，當有Zr存在時，Zr與多肽的磷酸基團之間發生多重螯合作用，使得金納米粒子?多肽復合物團聚，導致金納米粒子?多肽復合物的紫外吸收減小和共振光散射峰增大。蛋白激酶的濃度越大，多肽上產生的磷酸化位點越多，金納米粒子?多肽復合物的聚集就越明顯，金納米粒子的紫外吸收峰越小，實現了蛋白質激酶及其抑制劑的高靈敏檢測。

1.基于金納米粒子-多肽團聚效應的蛋白激酶及其抑制劑檢測方法，其特征在于蛋白
激酶及其抑制劑檢測：將金納米粒子-磷酸化多肽復合物與Zr⁴⁺溶液混合，在Zr⁴⁺的誘導作
用下，金納米粒子-磷酸化多肽復合物發生團聚，隨著蛋白激酶濃度的增加，金納米粒子的
紫外吸收峰減小，共振光散射強度增大，蛋白激酶活性與金納米粒子的紫外吸收強度呈負
相關，而抑制劑濃度與共振光散射強度呈負相關，實現了對蛋白激酶活性的檢測。
2.根據權利要求1所述的基于金納米粒子-多肽團聚效應的蛋白激酶及其抑制劑檢測
方法，其特征在于所述金納米粒子-磷酸化多肽復合物制備步驟如下：
（1）金納米粒子的制備：將50 mL 0.05 g/L的在磁力攪拌下加熱煮
沸，再快速加入1 mL質量百分數為5%的檸檬酸鈉溶液，溶液顏色由黃色變成深酒紅色后，持
續沸騰5分鐘，即合成了單分散的金納米粒子；
（2）金納米粒子-多肽復合物的制備：將1 mg牛血清蛋白、1 mL金納米粒子溶液和10 μL
500 μM多肽混合，在渦旋儀上旋轉10分鐘，4 °C下反應12小時后，在15000 rpm的轉速下離
心15分鐘，去除上層清液，將沉淀重懸于1mL濃度為35 mM、pH為7.5的Hepes緩沖溶液中，制
備成金納米粒子-多肽復合物；
（3）金納米粒子-多肽的磷酸化：將50 μL金納米粒子-多肽復合物、30 μL 500 U/mL蛋
白激酶A、20 μL 1 mM三磷酸腺苷和100 μL超純水混合，在37 °C孵育2小時，制得金納米粒
子-磷酸化多肽復合物。
3.根據權利要求1或2所述的基于金納米粒子-多肽團聚效應的蛋白激酶及其抑制劑檢
測方法，其特征在于：金納米粒子的光散射強度隨著蛋白激酶抑制劑鞣花酸濃度的增加而
降低，這是由于隨著鞣花酸濃度的增加，鞣花酸抑制了蛋白激酶的活性，使得蛋白激酶催化
多肽磷酸化反應的能力下降，金納米粒子-多肽復合物發生磷酸化的程度降低，表明鞣花酸
對蛋白激酶活性有良好的抑制作用。