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實時熒光PCR檢測貉子源性成分的引物探針及方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-29
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310418647.1 
  • 技術(專利)名稱 實時熒光PCR檢測貉子源性成分的引物探針及方法 
  • 項目單位 中華人民共和國吉林出入境檢驗檢疫局
  • 發明人 劉金華,史艷宇,劉韜,孟日增,聶丹丹 
  • 行業類別 醫療器械-醫療實驗室
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 許瀾馨
  • 發布時間 2022-01-29  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種實時熒光PCR檢測貉子源性成分的引物、探針及具體檢測方法,具有良好的靈敏性和特異性,采用實時熒光PCR特異擴增法可以定性分析畜肉食品中是否含有貉子源性成分,發揮了實時熒光PCR檢測技術的優點,進一步完善了食品檢測體系,加大對消費者利益的保護力度。
    展開
  • 02

    說明書

    1.實時熒光PCR檢測貉子源性成分的引物探針,分別為:上游引物Pl:CTATACCTGGCATCTGGTTCTTACC;下游引物P2:GTCCCATTTGAGTGGATTAGTAGGA;帶有熒光染料的探針序列為:?CAGGGCCATGAACTCCCTCCATCC。2.根據權利要求1所述的實時熒光PCR檢測貉子源性成分的引物探針,其特征在于:所述的熒光染料,5′端為FAM標記,3′端eclipse標記。3.實時熒光PCR檢測貉子源性成分的方法,其步驟如下:a.提取待檢樣品基因組DNA;b.以所提取的DNA作為模板,加入權利要求1所述的引物探針以及酶反應液進行實時熒光PCR反應,記錄樣品反應的Ct值。4.根據權利要求3所述的實時熒光PCR檢測貉子源性成分的方法,其特征在于:所述的實時熒光PCR反應體系為:2×Real-time?PCR預混液?10μL,10?μmol/L上游引物1μL,10?μmol/L下游引物???1μL,10?μmol/L??探針??????1μL,1~100?ng/μL樣品DNA??2μL,ddH2O??????????????????5μL。5.根據權利要求4所述的實時熒光PCR檢測貉子源性成分的方法,其特征在于:所述的實時熒光PCR反應條件為95℃10min,1個循環;95℃,15s,60℃30s,40個循環。6.根據權利要求5所述的實時熒光PCR檢測貉子源性成分的方法,其特征在于:所述的實時熒光PCR方法還設有空白對照、陰性對照、陽性對照,判定標準為:空白對照:以ddH2O為模板,按照權利要求4所述的實時熒光PCR反應體系和權利要求5所述的實時熒光PCR反應條件,進行實時熒光PCR反應,檢測Ct值大于或等于40;陰性對照:以非貉子源性物種基因組DNA為模板,按照權利要求4所述的實時熒光PCR反應體系和權利要求5所述的實時熒光PCR反應條件,進行實時熒光PCR反應,檢測Ct值大于或等于40;陽性對照:以貉子基因組DNA為模板,按照權利要求4所述的實時熒光PCR反應體系和權利要求5所述的實時熒光PCR反應條件,進行實時熒光PCR反應,檢測Ct值小于或等于34;待測樣品貉子源性基因檢測Ct值大于或等于40,陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常者,判定該樣品未檢出貉子源性基因;待測樣品貉子源性基因檢測Ct值小于或等于36,陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常者,判定該樣品檢出貉子源性基因;待測樣品貉子源性基因檢測Ct值在36-40之間,重做實時熒光PCR擴增,再次擴增后結果Ct值大于40,且陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常,判定該樣品未檢出貉子源性基因;再次擴增后結果Ct值仍小于40,且陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常,判定該樣品檢出貉子源性基因。
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