本發明提供了一種半胱氨酸測定比率熒光傳感器、制備方法和應用。本發明通過層層自組裝方法得到了鈣黃綠素@核快紅/水滑石復合薄膜，該熒光傳感器運用比率熒光的方法，利用兩個不同波長的熒光強度比率校準，提供一個不受環境干擾的背景信號，將熒光探針的高光學穩定性和比率熒光探針的優勢相結合，由于不受光源強度和儀器靈敏度的影響，將有效避免背景的干擾，比率熒光探針的靈敏度、選擇性大大提高；制備方法簡捷實用，成本低廉，可重復使用；對半胱氨酸的檢測具有很好的選擇性并在一定范圍內呈現出線性關系且具有靈敏度高、檢測限低、高效快捷等特點；薄膜還保持了水滑石無毒、穩定、良好生物相溶性、不易老化的特點。

1.一種半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，該方法以帶正電荷的水滑石剝層得到的層板為主體分子，以帶負電荷的鈣黃綠素和核快紅為客體分子，通過靜電引力層層自組裝形成超分子結構體系后制備成膜得到半胱氨酸測定比率熒光傳感器；所述方法包括以下步驟：a.對水滑石前體進行剝層處理；b.對石英片預組裝處理，使石英基底上負載一層正電荷；c.將預組裝處理后的石英片依次浸泡于鈣黃綠素水溶液、剝層處理得到的水滑石膠體溶液、核快紅水溶液、剝層處理得到的水滑石膠體溶液中，通過靜電引力進行單層自組裝；d.重復步驟c進行多層自組裝；所述主體分子的水滑石前體化學式為Mg_1-xAl_x(OH)₂(NO₃)_x·mH₂O，其中0.2≤x≤0.33，m為結晶水數量，取值范圍為0.5-9。2.根據權利要求1所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟a中的所述水滑石前體采用水熱合成法制備，化學式為：Mg_1-xAl_x(OH)₂(NO₃)_x·mH₂O,其中0.2≤x≤0.33，m為結晶水數量，取值范圍為0.5-9。3.根據權利要求2所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟a中的剝層處理為：氮氣保護下，將所述水滑石前體置于甲酰胺溶劑中，攪拌反應48h后離心，棄去沉淀物，得到剝層后的水滑石膠體溶液。4.根據權利要求1或3所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟b中的預組裝處理為：將石英片用體積比為7:3的濃H₂SO₄和H₂O₂的混合溶液清洗，再用乙醇和去離子水交替超聲各兩次，每次15min；然后將其置于PDDA溶液中浸泡30min，取出后用去離子水沖洗并在室溫下吹干。5.根據權利要求4所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟c中的鈣黃綠素水溶液和核快紅水溶液的濃度為10^-4mol/L，并用NaOH調節pH值為7。6.根據權利要求5所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟c中的單層自組裝過程為：將預組裝處理后的石英片置于鈣黃綠素水溶液中浸泡10min，取出后用去離子水清洗并在室溫下吹干；然后置于剝層后的水滑石膠體溶液中浸泡10min，取出后去離子水清洗并在室溫下吹干；再置于核快紅水溶液中浸泡10min，取出后去離子水清洗并在室溫下吹干；然后再置于剝層后的水滑石膠體溶液中浸泡10min，取出后去離子水清洗并在室溫下吹干。7.根據權利要求6所述的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的制備方法，其特征在于，重復10次步驟c，交替組裝成20層復合薄膜。8.根據權利要求1所述的方法制備得到的半胱氨酸測定比率熒光傳感器的應用，使用過的半胱氨酸測定比率熒光傳感器經硫酸銅溶液浸泡進行熒光猝滅后再次使用。