1.一種PPAR活性污染物的生物檢測方法,包括以下步驟:(1)以動物肝臟組織制備的含過氧化物酶體增生物激活受體PPAR和共激活維甲酸X受體Ratinoic?acid?X?receptor,RXR的細胞核提取液作為PPAR活性污染物的激活靶受體;(2)用納米金通過共價鍵合作用結合巰基修飾的PPRE探針上,該探針的核心序列為AGGTAA;以納米金通過共價鍵合作用標記在巰基修飾的PPRE探針上的具體方法是:合成含PPRE的巰基修飾序列Seq1及其互補序列Seq2;取納米金gold?nanoparticle,GNP溶液500ul,4℃,14,000rpm離心20min,棄上清;加入濃度為100uM巰基標記序列Seq1?4ul,和46ul?TE?buffer,pH8.0,混勻成50ul體系,4℃,12h;加等體積,即50ul?0.2M?NaCl,20mM?PB,即20mM?Na2HPO4和NaH2PO4緩沖液,pH?7.0,迅速混勻,4℃,24h;取上清,4℃,14,000rpm離心10min,棄上清,加100ul超純水重懸后再次離心,棄上清;加100ul?0.1M?NaCl,10mM?PB,pH7.0,混勻,置4℃儲存備用;取GNP-seq1單鏈45ul,100uM?seq2?3ul,5×雜交緩沖液12ul,由1.5M?NaCl,50mM?PB,0.05%SDS配制而成,25℃雜交4h,得GNP-PPRE,置4℃儲存備用;(3)將含PPAR和RXR的細胞核提取物與含PPAR活性污染物化合物的待測樣本共同孵育形成PPAR活性污染物PFOS-PPAR-RXR復合物;(4)抗RXR或PPAR抗體包被在酶標孔板上,通過抗原抗體反應,將激活的PPAR/RXR復合物固定于該載體上;(5)將載體上所形成的PFOS-PPAR-RXR復合物與含有編碼為AGGTAA序列的納米金標記PPRE探針共同孵育,使之相結合,具體方法是:加0.25%(v/v)乙酰酐100ul,0.25%(v/v)乙酰酐由250ul乙酰酐溶于100ml?0.1M三乙醇胺緩沖液制得,pH8.0,無自由胺;室溫,10min,再用1×PBS+0.1%tween20洗滌3次;取0.01M?PBS緩沖液,pH8.0,95ul稀釋已雜交好的GNP-PPRE?5ul,加入酶標孔內,與PPAR/RXR復合物特異性結合,37℃溫育60min,輕搖;0.01M?PBS緩沖液洗滌3次。?(6)利用銀染增強技術使因復合物結合而保留下的探針的納米金標記信號得以放大,并實時讀取吸光度值,根據保留下的納米金標記探針的量與誘導激活該復合物的PPAR活性污染物的量成正比例關系的特點,采用全氟辛烷磺酸PFOS制定標準曲線,從而計算得出待測樣本中PFOS當量值。2.根據權利要求1所述的PPAR活性污染物檢測方法,其特征在于抗RXR或PPAR抗體包被在酶標孔板載體上,通過抗原抗體反應,將激活的PPAR/RXR復合物固定于該載體上的具體方法是:用碳酸鹽包被液將anti-PPAR抗體按合適比例稀釋,根據不同的實驗條件選擇稀釋度,每孔包被100ul,潮濕環境下4℃過夜;碳酸鹽包被液由Na2CO3?0.16g,NaHCO3?0.29g,H2O?100ml配制而成,pH9.6;0.01M?PBS,pH7.4,洗滌2次,拍干,取PFOS誘導激活的PPAR/RXR復合物95ul,移入anti-PPAR抗體包被好的酶標孔內,抗原抗體結合37℃溫育1h;0.01M?pH7.4的PBS緩沖液,洗滌3次。3.根據權利要求1所述的PPAR活性污染物檢測方法,其特征在于利用銀染增強技術納米金標記信號得以放大的具體方法是:取銀染增強液,銀染增強液由0.5g?AgNO3溶于2ml?H2O,12ul,1.7g氫醌hydroquinone溶于30ml?H2O,300ul,2.55g檸檬酸citric?acid和2.35g檸檬酸三鈉trisodium?citrate溶于10ml?H2O,100ul混合配制而成,現配現用,混勻后迅速加入4個酶標板孔內,每孔100ul,用酶標儀實時檢測銀染增強的OD值,于490nm波長檢測OD值,反應一定時間,置入超純水中,終止反應,該銀增強反應在避光或弱光下進行。?
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