福利一区二区三区视频在线观看-福利一区三区-福利一区视频-福利在线网址-妇女激情毛片-干干干操操操

您現在的位置: 首頁 > 技術轉讓 > 一種PPAR活性污染物的生物檢測方法

一種PPAR活性污染物的生物檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-01
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810047288.2 
  • 技術(專利)名稱 一種PPAR活性污染物的生物檢測方法 
  • 項目單位 華中科技大學
  • 發明人 徐順清,萬延建,劉瑋,李媛媛 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳其樺
  • 發布時間 2022-02-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了一種基于納米金銀染增強技術的PPAR活性污染物生物學檢測方法,它是將PFOS與含有PPAR受體和RXR受體蛋白的SD大鼠肝細胞核提取物孵育,激活PPAR受體,形成PFOS-PPAR-RXR復合物,并暴露出與納米金標記的雙鏈PPRE探針結合位點,形成PFOS-PPAR-RXR-PPRE復合物,在RXR單克隆抗體的特異性捕獲下,該復合物被固定于酶標板上,洗滌去除酶標板中的游離探針后,用銀染增強液處理,在490nm波長處檢測溶液的OD值,根據PFOS標準品濃度與OD值之間的關系,繪制劑量一效應關系曲線,由此標準曲線計算得出待測樣本中PPAR活性污染物的量,具有靈敏度高,檢測費用低,快速簡便,適于基層單位推廣等特點。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種PPAR活性污染物的生物檢測方法,包括以下步驟:(1)以動物肝臟組織制備的含過氧化物酶體增生物激活受體PPAR和共激活維甲酸X受體Ratinoic?acid?X?receptor,RXR的細胞核提取液作為PPAR活性污染物的激活靶受體;(2)用納米金通過共價鍵合作用結合巰基修飾的PPRE探針上,該探針的核心序列為AGGTAA;以納米金通過共價鍵合作用標記在巰基修飾的PPRE探針上的具體方法是:合成含PPRE的巰基修飾序列Seq1及其互補序列Seq2;取納米金gold?nanoparticle,GNP溶液500ul,4℃,14,000rpm離心20min,棄上清;加入濃度為100uM巰基標記序列Seq1?4ul,和46ul?TE?buffer,pH8.0,混勻成50ul體系,4℃,12h;加等體積,即50ul?0.2M?NaCl,20mM?PB,即20mM?Na2HPO4和NaH2PO4緩沖液,pH?7.0,迅速混勻,4℃,24h;取上清,4℃,14,000rpm離心10min,棄上清,加100ul超純水重懸后再次離心,棄上清;加100ul?0.1M?NaCl,10mM?PB,pH7.0,混勻,置4℃儲存備用;取GNP-seq1單鏈45ul,100uM?seq2?3ul,5×雜交緩沖液12ul,由1.5M?NaCl,50mM?PB,0.05%SDS配制而成,25℃雜交4h,得GNP-PPRE,置4℃儲存備用;(3)將含PPAR和RXR的細胞核提取物與含PPAR活性污染物化合物的待測樣本共同孵育形成PPAR活性污染物PFOS-PPAR-RXR復合物;(4)抗RXR或PPAR抗體包被在酶標孔板上,通過抗原抗體反應,將激活的PPAR/RXR復合物固定于該載體上;(5)將載體上所形成的PFOS-PPAR-RXR復合物與含有編碼為AGGTAA序列的納米金標記PPRE探針共同孵育,使之相結合,具體方法是:加0.25%(v/v)乙酰酐100ul,0.25%(v/v)乙酰酐由250ul乙酰酐溶于100ml?0.1M三乙醇胺緩沖液制得,pH8.0,無自由胺;室溫,10min,再用1×PBS+0.1%tween20洗滌3次;取0.01M?PBS緩沖液,pH8.0,95ul稀釋已雜交好的GNP-PPRE?5ul,加入酶標孔內,與PPAR/RXR復合物特異性結合,37℃溫育60min,輕搖;0.01M?PBS緩沖液洗滌3次。?(6)利用銀染增強技術使因復合物結合而保留下的探針的納米金標記信號得以放大,并實時讀取吸光度值,根據保留下的納米金標記探針的量與誘導激活該復合物的PPAR活性污染物的量成正比例關系的特點,采用全氟辛烷磺酸PFOS制定標準曲線,從而計算得出待測樣本中PFOS當量值。2.根據權利要求1所述的PPAR活性污染物檢測方法,其特征在于抗RXR或PPAR抗體包被在酶標孔板載體上,通過抗原抗體反應,將激活的PPAR/RXR復合物固定于該載體上的具體方法是:用碳酸鹽包被液將anti-PPAR抗體按合適比例稀釋,根據不同的實驗條件選擇稀釋度,每孔包被100ul,潮濕環境下4℃過夜;碳酸鹽包被液由Na2CO3?0.16g,NaHCO3?0.29g,H2O?100ml配制而成,pH9.6;0.01M?PBS,pH7.4,洗滌2次,拍干,取PFOS誘導激活的PPAR/RXR復合物95ul,移入anti-PPAR抗體包被好的酶標孔內,抗原抗體結合37℃溫育1h;0.01M?pH7.4的PBS緩沖液,洗滌3次。3.根據權利要求1所述的PPAR活性污染物檢測方法,其特征在于利用銀染增強技術納米金標記信號得以放大的具體方法是:取銀染增強液,銀染增強液由0.5g?AgNO3溶于2ml?H2O,12ul,1.7g氫醌hydroquinone溶于30ml?H2O,300ul,2.55g檸檬酸citric?acid和2.35g檸檬酸三鈉trisodium?citrate溶于10ml?H2O,100ul混合配制而成,現配現用,混勻后迅速加入4個酶標板孔內,每孔100ul,用酶標儀實時檢測銀染增強的OD值,于490nm波長檢測OD值,反應一定時間,置入超純水中,終止反應,該銀增強反應在避光或弱光下進行。?
    展開

專利技術附圖

服務流程

過戶資料

  • 買賣雙方需提供資料
  • 平臺提供
  • 過戶后您將獲得
  • 買家
  • 賣家
  • 公司
  • 企業營業執照
  • 企業營業執照

    專利注冊證原件

  • 個人
  • 身份證

    個體戶營業執照

  • 身份證

    專利注冊證原件

  • 專利代理委托書

    轉讓申請書

    轉讓協議

  • 手續合格通知書

    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

  • 品類齊全

    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
  • 專人跟進

    專業交易顧問全程服跟進,確保交易流暢。
  • 快速響應

    專業在線/電話客服服務,快速響應貼心服務。
  • 售后無憂

    資質過硬,國內大知識產權服務平臺。
  • -我要咨詢-
  • ×
聯系人:
專利名稱: *
聯系電話: *
驗證碼:

提交

關于我們 | 聯系我們

傳真:0435-3213171 電話:18801213919 郵箱:[email protected] 地址:吉林省通化市東昌區新華大街1003號(通化市科技成果轉化中心)


舉報電話:0435-5112631     舉報郵箱:[email protected]

備案號ICP備18003140號-1
主站蜘蛛池模板: 国产亚洲精品久久精品6 | 麻豆视频国产区 | 在线视频欧美亚洲 | 日本老熟五十路息孑安野由美 | 中文字幕欧美在线观看 | 无码国产精品一区二区色情男同 | 久久综合亚洲色一区二区三区精品丝袜 | 久久婷婷五月综合色丁香 | 国产精品嫩草影院一区二区三区 | 国产美女av在线 | 国产乱码精品一品二品 | 国产码欧美日韩高清综合一区 | 成人老师熟女 | 亚洲色婷婷综合久久二区 | 国产日韩麻豆电影一区二区 | 波多野结衣不打码视频 | 国产激情视频在线观看免费播放 | 丁香五月天婷婷开心久久 | 国产一级a爱在线观看 | 国产高潮久久精品av无码 | www亚洲精品 | 少妇被躁爽到高潮无码麻豆AV | 精品性影院一区二区三区内射 | 久久久久久久精品免费久精品 | 国产欧美丝袜二区在线 | 亚洲日韩国产成在线发布一区二区三区 | 日韩在线视频观看在线看 | 久久国产精品只做精品 | 精品天堂久久久久久无码尤物 | 久久久99精品免费观看精品 | 久操精品在线 | 国产欧美va欧美vahd | 国产精品私密 | 国产欧美日韩久久久久 | 国产成人精品一区二区视频 | 国产高清美女一级毛片久久 | 国产精品国产精品国产专区不卡 | 国产无人区码卡功能齐全 | 久青草网站| 色偷偷免费视频 | 国产中文精品字幕自在自线 |