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一種基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-20
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610975964.7 
  • 技術(專利)名稱 一種基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法 
  • 項目單位 華南師范大學
  • 發明人 胡勇軍,楊康,朱挺鋒,余萌,江寧靜,張文建 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 褚月
  • 發布時間 2022-01-20  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開一種基于磁核?金衛星組裝體的PSA檢測方法,屬于生物檢測領域。該方法是:將修飾有PSA適配體PSA aptamer的磁性納米顆粒,和修飾有與適配體部分互補的序列PSA CS的金納米顆粒,組裝形成核?衛星組裝體;當存在待測物PSA時,該組裝體的結構改變引起體系中上清液的拉曼信號的變化,基于此,可實現對PSA含量的檢測。本發明提供了一種基于捕獲探針?拉曼信號顆粒的核?衛星組裝體以實現對PSA超靈敏檢測的表面增強拉曼光譜方法,同時結合了磁性捕獲探針的磁性富集作用,通過檢測上清液而得到拉曼信號,具有靈敏度高,特異、選擇性高,檢測限低,操作簡便,方便快捷的優點,有著非常好的應用前景。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于包括如下步驟:
    首先,將修飾有PSA適配體PSA aptamer的磁性納米顆粒,和修飾有與適配體部分互補
    的序列PSA CS的金納米顆粒,組裝形成核-衛星組裝體;當存在待測物PSA時,該組裝體的結
    構改變引起體系中上清液的拉曼信號的變化,基于此實現對PSA含量的檢測;
    所述的PSA適配體序列為5'-NH2-(T)10-ATTAAAGCTCGCCATCAAATAGCTGC-3';
    所述的適配體部分互補的序列為5'-SH-(T)10-GCAGCTATTT-3';
    具體包括如下步驟:
    (1)采用活化劑活化表面修飾有羧基的磁性微粒,隨后加入PSA適配體制備成修飾有
    PSA適配體PSA aptamer的磁性納米顆粒,即捕獲探針;
    (2)先將拉曼信號分子結合到金納米顆粒表面,再將與步驟(1)中適配體部分互補的序
    列PSA CS修飾到該顆粒表面,制備成拉曼信號顆粒;
    (3)將步驟(1)中的捕獲探針和步驟(2)中的拉曼信號顆粒混合,利用捕獲探針上適配
    體與拉曼信號顆粒上互補序列的雜交,形成捕獲探針-拉曼信號顆粒的核-衛星組裝體;
    (4)用Tris-HCl緩沖溶液配制PSA溶液,并稀釋成一組具有濃度梯度的標準樣品液;
    (5)取相同體積的步驟(3)中核-衛星組裝體溶液,分別加入不同濃度的目標物PSA,室
    溫孵育,由于PSA會競爭性的與PSA aptamer反應,隨著PSA濃度的增加,核-衛星組裝體會有
    不同程度的解散,上清液中游離的拉曼信號顆粒濃度會發生相應的變化,通過磁分離作用
    分離底物,進而從上清液中得到不同的拉曼信號強度;
    (6)根據PSA濃度與拉曼信號強度的關系建立兩者之間的標準曲線,從而應用拉曼信號
    強度對PSA進行檢測。
    2.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:
    步驟(1)中所述的活化劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥
    珀酰亞胺;
    步驟(1)中所述的表面修飾有羧基的磁性微粒為表面修飾有羧基的四氧化三鐵,其粒
    徑為400~500nm。
    3.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:所述的
    修飾有PSA適配體PSA aptamer的磁性納米顆粒的溶液濃度為0.4~0.6mg/mL。
    4.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:步驟
    (2)中所述的拉曼信號分子為4,4'-聯吡啶;
    步驟(2)中所述的金納米顆粒平均粒徑為30nm~35nm;
    步驟(2)中所述的拉曼信號顆粒的溶液濃度為0.95~1.05mmol/L。
    5.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:
    步驟(3)中所述的捕獲探針和拉曼信號顆粒體積混合比例為3:(2~2.5)。
    6.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:步驟
    (4)中所述的濃度梯度為0、1、5、50、500pg/mL以及5、50ng/mL,其中0pg/mL為對照;
    步驟(5)中所述的室溫孵育的時間為8h~12h。
    7.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:
    步驟(5)中所述的核-衛星組裝體溶液與目標物PSA的體積比值為30~35。
    8.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:步驟
    (5)中所述的拉曼信號強度是通過顯微拉曼光譜儀測得;所述的顯微拉曼光譜儀的操作條
    件為激發光源是波長為632.8nm的He-Ne激光器,到達樣品的激光功率為1mW,信號收集時間
    為30~35s。
    9.根據權利要求1所述的基于磁核-金衛星組裝體的PSA檢測方法,其特征在于:步驟
    (5)中所述的拉曼信號強度是選取拉曼信號分子特征拉曼譜中最強的譜峰作為定量峰。
    展開

專利技術附圖

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