本發(fā)明公開(kāi)了一種基于表面等離子體耦合效應(yīng)的均相多組分免疫分析方法，分別制備了表面修飾有拉曼活性染料和捕獲抗體的金納米球探針和表面修飾有拉曼活性染料和檢測(cè)抗體的金納米棒探針，拉曼活性染料自身帶有巰基且無(wú)熒光背景，抗體經(jīng)TCEP還原處理。待測(cè)物抗原與抗體發(fā)生免疫夾心反應(yīng)，生成免疫復(fù)合物，拉近納米顆粒之間的距離，產(chǎn)生表面等離子體耦合效應(yīng)，顯著增強(qiáng)了納米顆粒表面修飾染料的拉曼信號(hào)，利用耦合增強(qiáng)效應(yīng)實(shí)現(xiàn)了對(duì)抗原的SERS定量分析。該方法簡(jiǎn)單、快速，檢測(cè)過(guò)程只需要一步操作，不需要反復(fù)洗脫，無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行分離，實(shí)現(xiàn)了樣品中含有多個(gè)組分的同步定量分析，靈敏度高，特異性好，有望成為蛋白組學(xué)研究和藥物療效評(píng)估的一種新方法。

1.一種基于表面等離子體耦合效應(yīng)的均相多組分免疫分析方法，包括制備表面修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米顆粒探針，抗原與抗體免疫夾心反應(yīng)使納米顆粒之間的距離拉近，產(chǎn)生表面等離子體耦合效應(yīng)，顯著增強(qiáng)納米顆粒表面修飾染料的拉曼信號(hào)，利用耦合增強(qiáng)效應(yīng)和拉曼光譜自身性質(zhì)實(shí)現(xiàn)了多組分SERS定量分析；所述抗體均經(jīng)過(guò)三（2-羧乙基）膦鹽酸鹽還原處理。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于表面等離子體耦合效應(yīng)的均相多組分免疫分析方法，包括如下步驟：（1）制備表面修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米顆粒探針；（2）將待測(cè)物樣品加入到含有步驟（1）所述的金納米顆粒探針的PBS緩沖溶液中，進(jìn)行免疫夾心反應(yīng)；（3）對(duì)反應(yīng)后的樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)。3.如權(quán)利要求2所述的分析方法，其特征在于，步驟（1）所述的金納米顆粒探針包括修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米棒探針，修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米球探針。4.如權(quán)利要求2所述的分析方法，其特征在于，步驟（3）所述的檢測(cè)是對(duì)反應(yīng)后的樣品溶液進(jìn)行拉曼光譜掃描。5.如權(quán)利要求2至4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：（1）制備表面修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米棒探針：（a）取三（2-羧乙基）膦鹽酸鹽溶液加入到抗體溶液中，充分混勻，37℃培育；（b）取金納米棒溶液，離心去除多余的CTAB保護(hù)劑，將金納米棒重新分散在滅菌水中，取中性表面活性劑Brij?56溶液加入到金納米棒溶液中，充分混勻，37℃培育，置換掉金納米棒表面的CTAB保護(hù)劑，再次離心去除多余的Brij?56，將金納米棒重新分散在滅菌水中；（c）向步驟（b）所得的金納米棒溶液中加入經(jīng)步驟（a）還原處理后的抗體溶液，30℃培育；取拉曼染料溶液加入到該溶液中，充分混勻，30℃培育；再加入BSA溶液，充分混勻，30℃培育；標(biāo)記過(guò)程結(jié)束后，反復(fù)離心三次去除多余的抗體和拉曼染料，將離心得到的金納米棒重新分散在PB溶液中，4?℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫唬?）制備表面修飾有拉曼活性染料和抗體的金納米球探針：（a）取三（2-羧乙基）膦鹽酸鹽溶液加入到抗體溶液中，充分混勻，37℃培育；（b）取金納米球溶液，離心去除上層溶液，將金納米球重新分散在滅菌水中，取拉曼染料溶液加入到該溶液中，充分混勻，37℃培育；加入經(jīng)步驟（a）還原處理后的抗體溶液，充分混勻，37℃培育；再加入BSA溶液，充分混勻，37℃培育；標(biāo)記過(guò)程結(jié)束后，反復(fù)離心三次去除多余的抗體和拉曼染料，將離心得到的金納米球重新分散在PB溶液中，4?℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫唬?）對(duì)反應(yīng)后的樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)：分別取步驟（1）制備的金納米棒探針，步驟（2）制備的金納米球探針和含有待測(cè)物抗原的樣品溶液加入到PBS緩沖溶液中，充分混勻，37℃培育，反應(yīng)結(jié)束后，使用拉曼光譜儀對(duì)產(chǎn)物溶液進(jìn)行拉曼光譜掃描。