本發明公開了一種構建高產5?氨基乙酰丙酸大腸桿菌工程菌株的方法，屬于代謝工程和微生物發酵領域。本發明在使用載體pACYCDuet?1過量表達5?氨基乙酰丙酸C5合成途徑關鍵酶谷氨酰?tRNA還原酶和谷氨醛氨基轉移酶的基礎上，將來源于大腸桿菌血紅素生物合成途徑中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD編碼)及糞卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF編碼)，使用pCDFDuet?1單獨表達或共表達兩個酶基因，構建重組菌株。通過發酵驗證，單獨表達hemD或hemF以及共表達hemD和hemF，ALA產量均明顯提高。

1.一種高產5-氨基乙酰丙酸的大腸桿菌工程菌株，其特征在于，在串聯表達C5途徑基
因hemL和hemA的基礎上，再串聯表達編碼尿卟啉原III合酶的基因hemD和糞卟啉原III氧化
酶的基因hemF；所述hemL的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，hemA的核苷酸序列如SEQID
NO.2所示；所述hemD的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述hemF的核苷酸序列如SEQ ID
NO.4所示；以大腸桿菌BL21(DE3)為表達宿主。
2.根據權利要求1所述的大腸桿菌工程菌株，其特征在于，所述hemL與hemA以
pACYCDuet-1為表達載體進行串聯表達，得到表達載體pACYCDuet-1-hemL-hemA。
3.根據權利要求1所述的大腸桿菌工程菌株，其特征在于，串聯表達hemD和hemF時，所
用表達載體是pCDFDuet-1。
4.一種構建權利要求1所述大腸桿菌工程菌株的方法，其特征在于，利用pACYCDuet-1
串聯表達hemL和hemA，以pCDFDuet-1串聯表達編碼尿卟啉原III合酶的基因hemD和糞卟啉
原III氧化酶的基因hemF，轉化篩選獲得高產5-氨基乙酰丙酸的大腸桿菌工程菌株
Escherichia coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1-hemL-hemA pCDFDuet-1-hemD-hemF。
5.應用權利要求1所述大腸桿菌工程菌發酵生產5-氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，
將工程菌株活化后，轉接發酵培養基，30-37℃，200r/min培養，發酵周期28-36h。